Assessment of RNA Stability for Age Determination of Body Fluid Stains

Abstract

Time of deposition of a biological stain can be of value to determine the relevance of a sample in a forensic investigation. We assessed the possibility of using RNA transcript detection by duplex real-time PCR (RT-qPCR) to determine the age of body fluid stains commonly encountered in forensic biology. Targets included the ribosomal 18S RNA and the human β-actin, GAPDH and cyclophilin A mRNAs. Our results obtained from samples stored over a six month interval showed that the rate of RNA decay is similar for all markers tested in each type of tissue. For blood and semen, RNA degradation profiles of each target are correlated with time of storage. Moreover, the degradation rate of each target differs depending on the nature of the stain. In our study, decay rates of rRNA vs. mRNA targets did not exhibit significant differences, we suggest, however, that the degradation profiles of individual RNA markers may be useful to estimate the age of a sample as an exclusionary test. To our knowledge, this is the first study to investigate RNA stability in dried blood, semen, and saliva stains concurrently for age determination. We also assessed the impact of freezing biological stains at—80°C to determine if subsequent analysis would result in the loss of relevant information.

Résumé

Le moment où une tache de fluide biologique a été déposée sur une scène de crime peut être important pour déterminer la pertinence d'un échantillon dans une enquête. Nous avons évalué la possibilité de déterminer l'âge de taches des fluides les plus communs dans un contexte judiciaire par la détection de transcrits d'ARN mesurés par PCR en temps-réel (RT-qPCR). Nous rapportons les profils de dégradation de l'ARN ribosomique 18S et des ARNm de la β-actine, de la glyceraldehyde-3-phosphate déhydrogénase et de la cyclophiline A, obtenus de taches entreposées sur une période de 6 mois. La stabilité de tous les marqueurs choisis dans cette étude est similaire pour un même fluide. Pour le sang et le sperme, les profils de dégradation des ARN seuls contient avec le temps d'entreposage des taches. Nos résultats montrent que l'analyse de différents ARN par RT-qPCR pourrait être utilisée pour estimer l'âge des taches de sang et de sperme par groupes d'âge. Il s'agit, à notre connaissance, de la première étude analysant la dégradation de l'ARN simultanément dans des taches de sang, de salive et de sperme à des fins de datation. Nous avons également évalué l'impact de la congélation à -80°C sur la stabilité des échantillons après leur prélèvement sur la scène de crime.