Abstract
We have characterized balanced growth of yeast and hyphal cells of Histoplasma capsulatum and cells during transition from yeast to hyphae in a newly developed synthetic medium, R3B3 Homogeneous populations of yeast at 37°C and hyphae at 25°C grew in this medium with generation times of 10h and 19h, respectively. The growth rates were exponential, as demonstrated by the kinetics of net increase in dry weight. Identical rates of net increase were observed for ribonucleic acid (RNA) and protein, indicating conditions which approached steady state growth. In addition, this defined medium facilitated incorporation of radioactive precursors into RNA and protein and thus will allow for future detailed studies of macromolecular synthesis.
When the incubation temperature of growing yeast cells was switched from 37°C to 25°C, the growth rate decreased as indicated by an increase in the generation time (19h). Although the kinetic rates of RNA and protein synthesis also decreased, these rates were slightly faster relative to that observed for the increase in dry weight. During the later stage(s) of the yeast to hyphae transition a marked increase and subsequent decrease was observed for both RNA and protein. After this period of time, the synthesis of RNA and protein proceeded at the steady state rates usually observed in hyphal cultures.
Résumé
Nous avons utilisé un nouveau milieu synthétique, R3B3, afin de déterminer les caractéristiques de la croissance équilibrée de cellules de levure et de cellules hyphales d'Histoplasma capsulatum, ainsi que des cellules en cours de transformation de levure à hyphe. Dans ce milieu, les temps de génération de cultures homogènes de levures (à 37°C) ou d'hyphes (à 25°C) est de 10h et 19h, respectivement. L'augmentation du poids see indique des taux de croissance exponentiels. Les taux d'augmentation de l'acide ribonuléique (ARN) et des protéines sont identiques, ce qui signifie que le régime de croissance est equilibré. R3B3 facilite aussi l'incorporation de précurseurs radioactifs dans TARN et dans les protéines et, de ce fait, permettra des études détaillées concernant la synthèse de macromolécules.
Une réduction de la température d'incubation des cellules de levure de 37°C à 25°C réduit le taux de croissance ce qui prolonge le temps de génération de 10h à 19h. Les taux de production de l'ARN et des matierès protéiques, bien que réduits également, sont légèrement supérieurs au taux d'augmentation du poids see, Au cours des dernières phases de la transformation levure-hyphe, les taux de synthèse de l'ARX et des protéines augmentent nettement, puis diminuent avant de rejoindre les taux caractéristiques des cultures hyphales.