Gallibacterium anatis-secreted metalloproteases degrade chicken IgG

Abstract

Gallibacterium anatis (previously named Pasteurella haemolytica-like) is considered a normal inhabitant of genital and upper respiratory tracts of healthy chickens, but it is also associated with different pathological conditions. Secreted metalloproteases from field and reference G. anatis cultures were obtained by methanol precipitation and were characterized. Proteins of molecular mass higher than 100 kDa showing proteolytic activity were observed in 10% polyacrylamide gels copolymerized with 1% bovine casein. They were active at alkaline pH, and inhibited by ethylenediamine tetraacetic acid. Their activity was stable at 50°C, but partially inhibited at 60°C, and totally inhibited at higher temperatures. Secreted proteins were able to degrade chicken IgG after 24 h of incubation, and cross-reacted with a polyclonal antibody against purified protease from Actinobacillus pleuropneumoniae. Secreted metalloproteases could play a role in infections caused by G. anatis.

Les métalloprotéases secrétées par Gallibacterium anatis dégradent les IgG de poulet

Gallibacterium anatis (auparavant nommé Pasteurella haemolytica-like) est considéré comme un habitant normal du tractus génital et du tractus respiratoire supérieur des poulets sains, mais ce germe est aussi associé à différentes conditions pathologiques. Les métalloprotéases secrétées par les cultures de G. anatis, réalisées à partir de souches de référence ou de terrain, ont été obtenues par précipitation au méthanol puis ont été caractérisées. Des protéines de masse supérieure à 100 kDa montrant une activité protéolytique ont été observées dans 10% des gels de polyacrilamide copolymérisés avec 1% de caséine bovine. Elles étaient actives à un pH alcalin et inhibées par l'EDTA. Leur activité était stable à 50°C, mais partiellement inhibée à 60°C, et totalement inhibée à des températures supérieures. Les protéines secrétées sont capables de dégrader les IgG de poulet après 24 h d'incubation et réagissent avec un anticorps polyclonal anti protéase purifiée d' Actinobacillus pleuropneumoniae. Les metalloprotéases pourraient jouer un rôle dans les infections causées par G. anatis.

Von Gallibacterium anatis sezernierte Metalloproteasen bauen Hühner-IgG ab.

Gallibacterium anatis (früher als Pasteurella haemolytica-ähnlich bezeichnet) wird als normaler Bewohner des Genital-und Respirationstrakt von gesunden Hühnern angesehen, ist aber auch mit verschiedenen pathologischen Veränderungen assoziiert. Sezernierte Metalloproteasen von G.anatis-Kulturen von Feld- und Referenzstämmen wurden durch Methanolfällung gewonnen und charakterisiert. Proteine mit einem Molekulargewicht von über 100 kDa wiesen proteolytische Aktivität in 10%igen Polyacrylamidgelen auf, die mit 1% Rinderkasein ko-polymerisiert waren. Sie waren aktiv im basischen pH-Bereich und wurden durch EDTA gehemmt. Ihre Aktivität war bei 50°C stabil, wurde aber partiell inhibiert bei 60°C und vollkommen inaktiviert bei noch höheren Temperaturen. Die sezernierten Proteine waren in der Lage, 24 Stunden nach der Inkubation Hühner-IgG abzubauen und zeigten eine Kreuzreaktion mit einem polyklonalen Antikörper gegen gereinigte Protease von Actinobazillus pleuropneumoniae. Sezernierte Metalloproteasen könnten bei durch G. anatis verursachten Infektionen eine Rolle spielen.

Las metaloproteasas secretadas por Gallibacterium anatis degradan las IgG de pollo

Gallibacterium anatis (previamente llamado Pasteurella haemolytica-like) se considera un habitante normal del tracto genital y respiratorio superior de pollos sanos, pero también se asocia con diferentes condiciones patológicas. Se obtuvieron y caracterizaron diferentes metaloproteasas del cultivo de cepas de campo y de referencia de G. anatis mediante la precipitación con metanol. Se detectaron proteínas con un peso molecular de más de 100 kDa que mostraban actividad proteolítica en geles de poliacrilamida al 10 % copolimerizados con caseína bovina al 1%. Eran activas a pH alcalino y se inhibían con EDTA. Su actividad era estable a 50 °C, pero se inhibía parcialmente a 60 °C, y totalmente a temperaturas más elevadas. Las proteínas secretadas eran capaces de degradar IgG de pollo tras 24 h de incubación, y presentaron reactividad cruzada con un anticuerpo policlonal contra proteasa purificada de Actinobacillus pleuropneumoniae. Las metaloproteasas secretadas podrían jugar algún papel en la infección causada por G. anatis.

This work was supported by DGAPA-UNAM. Project PAPIIT: IN219203 and CONACYT, project: G38590-B. The English version was revised by M. en C. Isabelle Blanckaert.