Beitrag zur differenzierung von haemophilus‐ stämmen aus hühnern IV. Mitteilung: Untersuchungen über die dissoziation von haemophilus paragallinarum

Zusammenfassung

Es wurden zwei Erscheinungsformen eines H. paragallinarum‐Stammes morphologisch, kulturell, biochemisch und serologisch untersucht.

Oberflächenkulturen der M‐Form (mucoid) waren nach 8–14 stündiger Inkubation bekapselt und zeigten im schrägen Licht auf Transparentnährmedien Irideszenz, die jedoch nach 36 Std. Inkubation vollständig verschwunden war. Bakterien dieser Form bildeten in 0,15 M NaCl‐Lösung stabile homogene Suspensionen. Flüssigmedien wurden durch Wachstum diffus getrübt. In bakterienfreier Kultur‐ und Waschflüssigkeit ließ sich in der indirekten Hämagglutination eine lösliche typspezifische Substanz nachweisen.

Bei der durch Dissoziation entstandenen R‐Form (rough) waren nach 8–14 stündiger Inkubation Kapseln nicht nachweisbar (Minusvariante). Bakterien dieser Form zeigten Spontanagglutination in 0,15 M NaCl‐Lösung und ein granuläres Wachstum in Flüssigmedium. Biochemisch waren keine Unterschiede zur M‐Form feststellbar. Im indirekten Hä'magglutinationstest konnte eine typspezifische Substanz nicht nachgewiesen werden. Anti‐R‐Seren reagierten im Objektträger‐Agglutinations‐Test nicht mit der M‐Form. In SPF‐Hühnerküken, die mit der 6 und 20 Nährbodenpassage dieser Form intranasal inokuliert wurden, erfolgte eine Reversion der R‐ in die M‐Form (R ? M).

Es konnte festgestellt werden, daß Nährmedien einen direkten Einfluß auf die Bakterien‐ und Koloniemorphologie von H. paragallinarum haben können. Das frühzeitige autolytisch bedingte Verschwinden der Kapseln und Irideszenz sind bei der Beurteilung des Erscheinungsbildes dieser Bakterien zu berücksichtigen.

Summary

Bacteria of 2 phenotypic forms of one strain of Haemophilus paragallinarum were morphologically, culturally, biochemically and serologically investigated.

On transparent solid media bacteria of the M variant (mucoid) were capsulated and showed iridescence in oblique transmitted light throughout the first 8–14 hours of incubation. Iridescence disappeared completely after 36 hours incubation. Bacteria of this variant formed stable homogeneous suspensions in 0.15 M NaCl and an homogeneous cloudiness after growth in liquid media. A type specific soluble substance was found in fluid culture filtrates and in bacterial washings using the indirect haem‐agglutination test.

Bacteria of the R variant (rough) derived by dissociation of iridescent colonies were not capsulated and showed no iridescence throughout 8–14 hours incubation (minus variant). This bacteria showed spontaneous agglutination in 0.15 M NaCl and a granular growth in liquid media. There were no biochemical differences between M and R variant. A type specific substance was not found in the R bacteria using the indirect haemagglutination test. In the plate agglutination test no serological reaction between anti‐K‐sera and M antigen were observed. R to M variation occurred in SPF chickens following intranasal inoculation of organisms of R cultures grown for 6 or 20 passages on solid medium.

It was found that the morphology of the rods and the colonies of Haemophilus para‐gallinarum can be influenced by the culture media. For viewing cultures it should be noted that capsules and iridescence quickly disappear by autolysis.

Resume

Deux variations phénotypiques d'une souche d’Haemophilus paragallinarum furent analysées du point de vue morphologique, cultural, biochimique et sérologique.

Après une incubation de 8–14 heures, des cultures superficielles de la forme M (mu‐coïde) s'étaient enveloppées de capsules et montraient en lumière oblique, sur milieu nutritif transparent, de l'iridescence, qui après 36 heures d'incubation avait disparu. Ces microorganismes formaient une suspension homogène stable dans une solution de 0,15 M NaCl. Les milieux liquides furent rendus moins transparents par leur croissance. Une substance soluble, spécifique, pour le type analysé, fut trouvée à 1’ aide de l'hémagglutination indirecte dans des filtrats de culture exempts de microorganismes et dans le liquide de lavage des bactéries.

La forme R (rough), dérivée par dissociation des colonies iridescente, ne montrait pas de capsules après 8–14 heures d'incubation (minus variant). Ces microorganismes s'agglutinaient spontanément dans une solution de 0,14 M NaCl; en milieu liquide, ils montraient une croissance granuleuse. Il n'y avait pas de différence biochimique entre les variants M et R. Aucune substance spécifique ne fut trouvée à l'aide du test d'he‐magglutination indirecte. Il n'y eut pas de réaction d'agglutination entre des sérums anti‐R et la torme M. Chez des poussins SPF des réversions entre ies formes R ? M se déroulaient après inoculation intranasale d'organismes issus du sixième et vingtième passage sur milieu solide de cette forme.

On a pu constater que les milieux nutritifs pouvaient avoir une influence directe sur la morphologie des microorganismes et des colonies à'Haemophilus paragallinarum. En analysant ces variations phénotypiques, il faut considérer la disparition rapide autolytique des capsules et de l'iridescence.

Notes

Gefördert mit Forschungsmitteln der Deutschen Forschungsgemeinschaft