A comparative study of some cultural methods in the isolation of avian mycoplasma from field material

Summary

Comparison was made between direct plating onto mycoplasma agar and culture in overlay or broth in the recovery of mycoplasma from avian field material from poultry, wild and exotic birds. The value of an atmosphere of increased carbon dioxide, provided by 5% carbon dioxide in nitrogen or by ‘candle jar’, and of ‘restreaking’, was also investigated.

From a total of 1784 tissues examined in four experiments mycoplasma were recovered from 463 involving 509 strains. Of these strains, 73% were grown by direct plating, 82% by a combination of subcultures from overlay and fewer by the individual overlay subcultures. A proportion of recoveries was made by each method alone.

Recovery of mycoplasma through culture in broth was markedly inferior to either direct plating or overlay culture. There was no apparent advantage in incubating mycoplasma plates in an atmosphere of increased carbon dioxide. Restreaking increased recoveries by only a small number.

The mycoplasma recovered included the following recognised avian species or serotypes:— M. gallisepticum, M. gallinarum, serotype D, M. iners, sero‐type F, M. meleagridis, serotype I, M. synoviae, M. anatis, A. laidlawii, and a number of untyped strains especially from exotic birds. Combinations of two or more serotypes were also isolated from approximately 10% of the tissues from domestic poultry.

Although most serotypes were isolated by both direct plating and overlay methods, the recovery of serotype I and M. meleagridis seemed to be favoured by direct plating while M. gallisepticum and a number of untyped organisms were more frequently isolated after culture in overlay. The only organism recovered by one method alone was serotype D (from overlay) but only three recoveries were made.

In the examination of avian tissue using conventional media it would seem that for maximum recovery of mycoplasma direct plating together with subcultures from overlay could be recommended. Incubation of plates in additional carbon dioxide seems unnecessary and ‘restreaking’ is of limited value.

Resume

La comparaison a été faite entre l'ensemencement direct sur gélose pour mycoplasmes, l'ensemencement en double couche ou en bouillon, afin d'isoler les mycoplasmes à partir de prélèvement du terrain: volailles, oiseaux sauvages et exotiques. L'intérêt d'augmenter la concentration en gaz carbonique obtenue avec 5% de gaz carbonique dans l'azote ou en jarre anaérobie, de même que l'intérêt de multipler les stries sur gélose ont été aussi étudiés.

Sur un total de 1784 tissus examinés dans quatre expériences, 509 souches de mycoplasmes ont été réisolées à partir de 463 d'entre eux.

Parmi ces souches 73% se sont développées par ensemencement direct, 82% en combinant les subcultures en double couche et un pourcentage moindre avec des subcultures seules. Une partie des réisolements a été réalisée avec l'une des techniques employée seule.

Le nombre des réisolements de mycoplasmes en bouillon a été nettement inférieur à celui obtenu soit par l'enzemencement direct soit par ensemencement en double couche. Il n'apparait pas utile d'incuber les cultures de mycoplasmes en atmosphère enrichi en gaz carbonique. La multiplication des stries sur gélose augmente peu le pourcentage de réisolement des germes.

Les mycoplasmes isolés concernaient les espèces ou sérotypes connus suivants: M. gallisepticum, M. gallinarum, sérotype D, M. iners, sérotype F, M. meleagridis, séro‐type I, M. synoviae, M. anatis, A. laidlawii et un certain nombre de souches non typées provenant particulièrement des oiseaux exotiques. Une association de deux sérotypes ou plus a été observée à partir de 10% environ des tissus provenant de volailles domestiques.

Bien que la plupart des sérotypes ont été isolés à la fois par ensemencement direct et en double couche, le réisolement du sérotype I et de M. gallisepticum et un certain nombre d'autres microorganismes non typés ont été plus fréquemment isolés après culture en double couche.

Le seul microorganisme réisolé uniquement par l'une des méthodes a été le sérotype D (double couche) mais il n'a été isolé que trois fois.

Pour les examens de tissu aviaire, utilisant les milieux conventionnels, il semblerait que l'inoculation directe en même temps que des subcultures par ensemencement en double couche, doive être recommandée pour obtenir le maximum de réisolements de mycoplasmes. L'incubation des milieux en atmosphère enrichi de gaz carbonique ne semble pas nécessaire et la multiplication des stries sur gélose est d'un intérêt limité.

Zusammenfassung

Es wurde die Anzüchtung von Mycoplasmen aus Feldmaterial von Hausgeflügel, Wild‐und exotischen Vögeln mittels Direktausstrich auf Mycoplasmaagar mit der Kultur in Overlay oder Flüssignährböden verglichen. Der Wert einer erhöhten CO₂ Atmosphäre, die entweder durch 5% Kohlendioxyd in Nitrogen oder im “Kerzentopf “ erreicht wurde und von wiederholtem Ausstreichen, wurde ebenfalls untersucht.

Aus 463 von insgesamt 1784 bei vier Versuchen untersuchten Gewebeproben wurden 509 Stämme isoliert. Von diesen Stämmen waren 73% nach Direktausstrich gewachsen, 82% bei einer Kombination von Subkulturen aus Overlay und einige wenige bei individuellen Overlaysubkulturen. Ein Teil der Isolate wurde durch jeweils eine Methode allein gefunden.

Die Auffindungsrate der Mycoplasmen in Flüssigkulturen war derjenigen bei direktem Ausstrich oder Overlaykulturen unterlegen. Die Inkubation von Mycoplasmenplatten in einer Atmosphäre mit erhöhtem Kohlendioxydgehalt brachte keinen erkennbaren Vorteil. Wiederholte Ausstriche erhöhten die Auffindungsrate nur wenig. Die gefundenen Mycoplasmen gehörten zu folgenden anerkannten aviären Arten oder Serotypen: M. gallisepticum, M. gallinarum, Serotyp D, M. iners, Serotyp F, M. meleagridis, Serotyp I, M. synoviae, M. anatis, A. laidlawii. Außerdem wurde eine Anzahl von nicht näher typisierten Stämmen besonders aus exotischen Vögeln gefunden. Kombinationen von zwei oder mehr Serotypen wurden aus ungefähr 10% der Gewebeproben des Wirtschaftsgeflügels isoliert. Obwohl die meisten Serotypen sowohl durch Direktausstrich als auch durch die Overlaymethode isoliert wurden, schien die Auffindung von Serotyp I und M. meleagridis durch Direktausstrich begünstigt zu werden, während M. gallisepticum und eine Zahl von nicht typisierten Organismen häufiger nach Over‐laykultur isoliert wurde. Der einzige Organismus, der nur durch eine einzige Methode gefunden werden konnte, war Serotyp D (aus Overlay). Er wurde aber nur drei mal isoliert.

Nach der Untersuchung von Vogelgewebeproben unter Verwendung konventioneller Medien kann anscheinend der Direktausstrich zusammen mit Subkulturen über Overlay empfohlen werden. Die Inkubation der Platten unter Zusatz von Kohlendioxyd erscheint nutzlos und das wiederholte Ausstreichen ist nur von begrenztem Wert.

Notes

Present address: Agricultural University, Mymensingh, Bangladesh.