Presence of fowl parvovirus in fibroblast cell cultures prepared from uninoculated white leghorn chicken embryos

Summary

Chicken embryo fibroblast cell cultures prepared from commercial uninoculated White Leghorn eggs showed a spontaneous degeneration. Upon staining with haematoxylin‐eosin intranuclear inclusion bodies of Cowdry type A were seen. Also, nuclear fluorescence was detected after indirect immunofluorescence staining with anti‐serum to fowl parvovirus strain ABU. Electron microscopy of thin sections revealed parvovirus‐like particles in both the nucleus and cytoplasm of the affected cells. During purification the viral particles banded in CsCl at a density of 1.42 to 1.43 g/ml and displayed typical parvovirus morphology by negative‐staining EM. The viral particles contained single‐stranded DNA of one polarity with a natural primer at the 3'‐end of the molecules. All these properties are characteristic of self‐replicating fowl parvovirus strongly suggesting its transovarial transmission.

Resume

Des cultures cellulaires de fibroblastes d'embryons de poulets préparées à partir de White Leghorn commerciales non inoculées ont montré une dégénérescence spontanée. Par coloration à l'hématoxyline‐eosine des corps d'inclusions intranucléaires de type A de Cowdry ont été observés. De plus, une fluorescence nucléaire a été décelée après coloration en immunofluorescence indirecte avec un antisérum préparé avec la souche ABU de parvovirus aviaire. La microscopie électronique de sections fines a révélé la présence de particules de pseudo‐parvovirus à la fois dans le noyau et le cytoplasme des cellules infectées. Pendant le purification, les particules virales ont formé des bandes en CsCl à la densité de 1,42 à 1,43 g/ml et montré par coloration négative en microscopie électronique une morphologie typique de parvovirus avec un primer naturel à la fin 3’ des molécules. Toutes ces propriétés sont caractéristiques de la réplication du parvovirus et suggèrent sa transmission transovarienne.

Zusammenfassung

Hühnerembryofibroblastenzellkulturen, die aus Eier kommerzieller, nicht inokulierter Weißer Leghornhühner präpariert wurden, zeigten eine spontane Degeneration. Nach Färbung mit Haematoxylin‐Eosion konnten intranukleäre Einschluß‐körperchen vom Typ Cowdry A festgestellt werden. Nach indirekter Immunofluo‐reszenzfärbung mit Antiseren gegen Hühnerparvovirus Stamm ABU wurde Kernfluoreszenz beobachtet. Im Elektronenmikroskop konnten in Dünnschnitten parvovirusähnliche Partikel sowohl im Kern als auch im Zytoplasma der veränderten Zellen gesehen werden, während der Reinigung fügten sich die Viruspartikel in CsCl bei einer Dichte von 1.42 bis 1.43 g/ml zusammen und zeigten bei Negativ‐färbung die typische Parvovirusmorphologie. Die Viruspartikel enthielten einfach strängige DNA mit einer Polarität mit einem natürlichen Primer am 3'‐Ende des Moleküls. Alle diese Eigenschaften sind typisch für das sich selbst vermehrende Hühnerparvovirus und sprechen für eine transovarielle Übertragung.

Resumen

Se prepararon cultivos celulares con fibroblastos de embrión de pollo a partir de huevos comerciales de pollos leghorn blancos no inoculados los cuales mostraron degeneración espontánea a la tinción con hematoxilina eosina, se observaron cuerpos de inclusión intranucleares del tipo A Cowdray. Asimismo se detectó una fluorecencia nuclear después de la tinción inmunofluorescente indirecta con anti‐suero de parvovirus aviares cepa ABV. La microscopía electrónica en capas finas reveló partículas semejantes a virus tanto en el núcleo como en el citoplasma de las células afectadas. Durante le purificatión de las partículas virales tratadas con CsCl a una densidad de 1.42 a 1.43 g/ml., además se observó una morfología típica de parvovirus a la tinción negativa EM. Las partículas virales contenían ADN de una sola trenza de una polaridad con una madurador natural de 3’ al final de las moléculas. Todas estas propiedades son características de una auto‐replica‐ción de los parvovirus aviares lo cual sugiere fuertemente su transmisión transo‐vanica.

Notes

Present address: Veterinary Research Institute of the Hungarian Academy of Sciences, H‐1581 Budapest, Pf.18, Hungary.