Some observations on the indirect Elisa for antibodies to Mycoplasma iowae serovar i in sera from turkeys considered to be free from Mycoplasma infections

Summary

A number of sera from turkeys considered to be uninfected with Mycoplasma iowae were examined by indirect ELISA using whole cell Ai. iowae serovar I antigen.

In an attempt to reduce the number of ‘false positive’ sera, assays were made (a) using plates blocked with foetal calf serum or skim milk before, or, bovine serum albumin after, coating with antigen, (b) using the absorbance difference method in which each serum was tested against mycoplasma antigen and medium antigen and (c) with unblocked plates but with serum heated to 56 C for 30 min. The upper limit of absorbance for the negative sera was determined using formulae already used by others including, the mean plus twice the standard deviation, the mean plus three times the standard deviation, (M + 3SD), twice the mean, 115% of the mean and four times the standard deviation.

Some reduction in the number of ‘false positive’ sera occurred after heating sera or using the formula of M + 3SD. This formula might, however, reduce the sensitivity of the test.

Resume

Des sérums de dindes considérés indemnes d'infection par M. iowae ont été examinés par la technique ELISA indirecte en utilisant comme antigène la cellule entière de M. iowae serovar‐1.

Dans le but de réduire le nombre de sérums faussement positifs, des essais ont été faits (a) en employant des plaques traitées préalablement pour saturer les sites antigéniques avec du sérum de veau foetal ou du lait écrémé ou consécutivement avec de la sérum albumine bovine (b) en utilisant la méthode des différences d’ absorbance dans laquelle chaque sérum est testé vis‐à‐vis de l'antigène mycoplas‐mique et de l'antigène correspondant au milieu et (c) avec des plaques non traitées mais avec des sérums chauffés à 56°C pendant 30 min. La limite supérieure d’ absorbance pour les sérums négatifs a été déterminée en utilisant des formules déjà adoptés par d'autres, incluant la moyenne plus deux fois la déviation standard, la moyenne plus trois fois le déviation standard (M + 3SD), deux fois la moyenne, 115% de la moyenne et quatre fois la déviation standard.

Quelques réductions dans le nombre de sérums faussement positifs ont été observées après chauffage des sérums ou en utilisant la formule M + 3SD. Cette formule cependant pourrait réduire le sensibilité du test.

Zusammenfassung

Zahlreiche Seren von Puten, die als frei von einer Mycoplasma iowae‐Infektion galten, wurden mit dem indirekten ELISA unter Verwendung von ganzen Zellen von M. iowae Serovar I als Antigen untersucht.

Es wurden verschiedene Versuche unternommen, um die Zahl der ‘falsch positiven’ Sera zu reduzieren: a) Verwendung von Platten, die mit foetalem Kälberserum oder Sauermilch vor, oder mit Rinderserumalbumin nach Antigenbeschichtung blockiert worden waren, b) Verwendung der Absorbancedifferenzmethode, bei welcher jedes Serum gegen Mycoplasmaantigen und Mediumantigen getestet wird und c) Verwendung nicht blockierter Platten, aber von einem auf 56°C 30 min erhitztem Serum. Der obere Grenzwert für die Absorption von negativen Seren wurde unter Verwendung einer bereits von anderen Autoren benutzten Formern bestimmt, inclusive der mittleren plus zweimal die Standartabweichung, die mittlere plus dreimal die Standartabweichung, (M + 3SD), zweimal die mittlere, 115% der mittleren und viermal die Standartabweichung.

Eine gewisse Reduktion der Zahl falsch positver Sera erfolgt nach Erhitzung der Sera oder bei Verwendung der Formel von M + 3SD. Diese Formel reduziert jedoch möglicherweise die Empfindlichkeit des Testes.

Resumen

Se examinó una cantidad de sueros de pavos a los que se consideraba no infectados con Mycoplasma iowae por medio de la técnica ELISA, empleando como antígeno, células completas del M. iowae serovariedad I.

En un intento por reducir el número de sueros ‘falsos positivos’, se hicieron pruebas (a) empleando antes placas bloqueadas con suero fetal de becerro o leche descremada o albúmina de suero bovino, después de revestir con el antígeno, (b) usando el método de la diferencia en la absorbancia, en el cual cada uno de los sueros fué probado contra el antígeno mycoplasma y un antígeno medio y (c) con placas no revestidas pero conteniendo suero calentado a 56°C durante 30 minutos. El límite mayor de absorbancia para los sueros negativos fué determinado empleando fórmulas ya usadas por otros, , incluyendo el promedio más dos veces la desviación estandar, el promedio más tres veces la desviación estandar (M + 3SD), dos veces el promedio 115% del promedio y cuatro veces la desviación estandar.