Comparison of cultural methods for primary isolation of infectious laryngotracheitis virus from field material

Summary

Primary isolation of infectious laryngotracheitis virus (ILT) from tracheal samples from 11 suspected field outbreaks was attempted using a variety of avian cell cultures, Vero cells and embryonated chicken eggs. Tracheal smears of each field sample were also examined by electron microscopy (EM) for the presence of herpesvirus particles.

Chick embryo liver cells (CELi) appeared to be the most rapid and sensitive isolation system of those examined with chick kidney (CK) a satisfactory alternative, both demonstrating virus in all 11 samples on first passage. Chick embryo kidney, chick embryo lung and the dropped chorioallantoic membrane of eggs were all less sensitive. Chick embryo fibroblasts and Vero cells were of no particular value for the primary isolation of ILT virus. EM was a useful method of rapid virus identification and confirmation but at least 3.51og10/0.1ml of infectious virus was required to be detected by this method.

Resume

L'isolement du virus de la laryngotrachéite infectieuse (ILT) à partir de prélèvements de trachée provenant de onze foyers de maladie a été réalisé à l'aide de différentes cultures de cellules d'oiseaux, de cellules Vero et d'embryons de poulet. Des frottis de chaque prélèvement du terrain ont aussi été examinés en micro‐scopie électronique pour la présence de particules de virus herpès.

Les cellules de foie d'embryons de poulet sont apparues être le matériel le plus rapide et le plus sensible pour isoler le virus, ainsi que les cellules de rein, qui ont permis de le mettre en évidence dans les onze prélèvements dés le premier passage. Les cellules de rein et de poumon d'embryon de poulet, les membranes chorio‐allantoïdiennes d'oeufs se sont avérées être moins sensibles. Les fibroblastes d'embryon de poulet et les cellules Vero sont sans intérêt pour l'isolement du virus de l'ILT. La microscopie électronique permet une identification rapide du virus ainsi que la confirmation de sa présence mais nécessite au moins 3,5 log10 par 0,1 ml de virus infectieux pour être détecté par cette méthode.

Zusammenfassung

Die Erstisolation des Virus der Infektiösen Laryngotracheitis (ILT) aus Tracheaproben von 11 verdächtigen Feldausbrüchen wurde mittels einer Reihe von aviaren Zellkulturen, Verozellen und Hühnerembryonen versucht. Trachealsbstriche von jedem Feldfall wurden auch mittels Elektronenmikroskopie (EM) auf die Anwesenheit von Herpespartikeln untersucht.

Hühnerembryoleberzellen (CELi) scheinen für die Isolation das schnellste und empfindlichste der untersuchten Systeme zu sein. Kükennierenzellen (CK) sind eine zufriedenstellende Alternative. Mit beiden Systemen konnte in allen 11 Proben das Virus in der ersten Passage nachgewiesen werden. Sowohl Hühnerembryonie‐ren‐als auch Hühnerembryolungenzellen und die abgesenkte Chorioallantoismem‐bran von Eiern waren weniger empfindlich. Hühnerembryofibroblasten und Verozellen waren für die Erstisolierung des ILT Virus nicht besonders geeignet. EM erwies sich als sehr geeignet für eine schnelle Virusidentifizierung und Bestätigung, aber es werden mindestens 3.5 logio/0.1 ml infektiöses Virus für einen Nachweis mit dieser Methode benötigt.

Resumen

Se intentó el aislamiento primario del virus de la laringotraquitis infecciosa (LTI) a partir de muestras traqueales tomadas a partir de 11 brotes de campo sospechosos, empleando una variedad de cultivos celulares aviares, células Vero y huevos embrionados de pollo.

Se examinaron frotis traqueales de cada muestra de campo por microscopía electrónica (ME) buscando la presencia de partículas de virus herpes.

Células de hígado de embrión de pollo (CHEP) mostraron ser el sistema de aislamiento más rápido y sensible, así como el empleo de células de riñón (CR) como 11 muestras durante el primer pasaje. Los ríñones de embrión de pollo, pulmones de embrión de pollo y la membrana corioalantoidea de huevo resultaron ser menos sensibles. Los fibroblastos de embrión de pollo y las células Vero no fueron de un valor particular para el aislamiento primario del virus de la LTI. La ME fue un método rápido para la identificación y confirmación del virus, pero se requieren de no menos de 3.5 Iog10/0.1 ml. de virus infectante para detectarlo por este método.