Detection of avian macrophages with concanavalin a

Summary

The reactivities of peroxidase‐labelled concanavalin A (con A: 20 jug/ ml) with sections from various avian lymphoid organs were compared. With chicken bursae, con A binding and subsequent differential staining detected a non‐lymphoid leukocyte population distributed throughout the sections. A comparable population was not observed in sections from the gland of Harder.

With free cells, con A at low concentrations was found to selectively bind to both macrophages and heterophils but not to lymphocytes. Flow cytometric analysis with fluorescein isothiocyanate‐labelled con A . also confirmed this selective binding.

Peroxidase‐labelled con A was used to detect non‐lymphoid leukocytes present in areas of metastasised tumours in tissues of quail‐chicken hybrids. Such staining was not seen in comparable normal tissues. Evidence that the tumour‐localised leukocytes were macrophages was shown by the reactivity of these cells with a monoclonal anti‐chicken la antibody.

It is concluded that con A binding can be used to identify tissue macrophages and may provide a useful diagnostic tool in birds.

Resume

Détection des macrophages aviaires à l'aide de la Concanavaline A

Les réactivités de la péroxydase marquée à la Concanavaline A (Con A 20 μg/ml) ont été comparées sur des sections de différents organes lymphofdes aviaires. Dans la bourse des poulets, la fixation de la Con A et la coloration différentielle consécutive a permis de déceler une population non lymphoi'de de leucocytes distribués à travers les différentes sections. Une population comparable n'a pas été observée dans la glande de Harder.

Avec des cellules libres la Con A aux faibles concentrations, a été trouvée sélectivement fixée à la fois aux macrophages et aux hétérophiles mais pas aux lymphocytes. Les analyses de flux cytométrique à l'isothiocyanate de fluoresceine marquée à la Con A a aussi confirmé cet attachement sélectif.

La péroxidase marquée à la Con A a été utilisée pour déceler les leucocytes non lymphoïdes présents dans les zones de métastases tumorales, dans les tissus d'hybride de caille et de poulet. Une telle coloration n'a pas été observée comparativement dans des tissus normaux. La preuve que les leucocytes localisés dans les tumeurs sont des macrophages a été apportée par la réactivité de ces cellules avec un anticorps monoclonal anti‐poulet Ia.

Il est conclu que la fixation de la Con A peut être utilisée pour identifier les macrophages des tissus et peut être un outil de diagnostic intéressant chez les oiseaux.

Zusammenfassung

Der Nachweis von aviären Makrophagen mit Concanavalin A

Die Reaktionen des mit Peroxidase markierten Concanavalin A (Con A: 20 jug/ml) mit Schnitten verschiedener aviärer Lymphorgane wurden verglichen. In Hühner‐bursen wurde durch Con A‐Bindung und anschließende Differenzierungsfärbung eine nichtlymphoide Leukozytenpopulation nachgewiesen, die über den ganzen Schnitt verteilt war. Eine ähnliche Zellpopulation wurde in Schnitten der Harder'‐schen Drüse nicht beobachtet.

Bei Verwendung freier Zellen wurde eine selektive Bindung mit geringen Con A‐Konzentrationen sowohl bei Makrophagen als auch bei Heterophilen, aber nicht mit Lymphozyten festgestellt. Eine cytometrische Durchflußanalyse mit Fluroscein‐isothiocyanate‐markiertem Con A bestätigte diese selektive Bindung.

Das mit Peroxidase markierte Con A wurde für den Nachweis nicht‐lymphoider Leukozyten in Tumormetastasen in verschiedenen Geweben von Hybridwachteln verwendet. Diese Färbung gelang in normalen Gweben nicht. Für die Makro‐phagennatur dieser in Tumoren vorhandenen Leukozyten spricht die Reaktion diese Zellen mit einem monoklonalen Anti‐Huhn Ia Antikörper.

Daraus läßt sich ableiten, daß die Con A‐Bindung für die Identifizierung von Gewe‐bemakrophagen verwendet werden kann und bei Vögeln eine wertvolle diagnos‐tiche Möglichkeit liefern kann.

Resumen

Demostracion de los macrófagos aviares con concanavalina A

Se comparó la reactividad de la concanavalina A Con A) con peroxidasa (Con A: 20 μg/ml en cortes de diferentes órganos linfoides aviares. En la bolsa de Fabrico, la unión de la Con A y otras tinciones diferenciales detectaron una población leuco‐citaria no linfoide distribuida por todos los cortes. No se observó una población comparable en cortes de la glándula de Harder. Empleando suspensiones celulares, la Con A a baja concentraciones se unió selectivamente a los macrófagos y a los heterófilos pero no a los linfocitos. El análisis por citometría de flujo con Con A marcada con isotiocianato de fluoresceina confirmó esta unión selectiva. Los conjugados a base de con A y peroxidasa se emplearon para detectar leucocitos no linfoides en tejidos con metástasis tumorales de híbridos de perdiz y pollo. Esta tinción no dió reacción en los tejidos equivalentes normales. Se comprobó que los leucocitos reactivos en la zona del tumor eran macrófagos al reaccionar también con el anticuerpo monoclonal anti Ia del pollo.