Detection of antibody to chicken anaemia agent: A comparison of three serological tests

Summary

A comparison was made between sensitivities of the virus neutralisation (VN) test, indirect fluorescent‐antibody (IFA) test and enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies to chicken anaemia agent (CAA). Sera from chickens inoculated with CAA at 11 weeks of age and from specific pathogen‐free (SPF) and field breeder chicken flocks were tested. Seroconversion was detected by the three tests in all the inoculated birds at 2 to 3 weeks post‐inoculation (pi). Neutralising antibody to CAA was still detectable in all the inoculated birds 37 weeks after infection, the end of the observation period. One of the seven inoculated birds tested by the ELISA gave positive results for the same period whereas the IFA test detected anti‐CAA antibody only for 9 weeks. In field sera, the VN test detected many more positive sera than did the ELISA and IFA test. No antibodies to CAA were detected in sera of SPF chickens by the three tests. The IFA test frequently gave false positive results when VN antibody‐negative sera were tested at dilutions of ≤1:50.

Resume

Une comparaison a été faite pour étudier la sensibilité comparée des techniques de neutralisation virale (VN), d'immunofluorescence indirecte (IFA) et immunoenzymatique (ELISA) en vue de la détection des anticorps de l'agent de l'anémie du poulet (CAA). Les sérums de poulets inoculés avec le CAA à 11 semaines d'âge ainsi que ceux de poulets exempts d'organismes pathogènes spécifiés (SPF) et ceux provenant d'un troupeau de reproducteurs sur le terrain ont été étudiés. La séroconversion a été décelée par les trois techniques deux à trois semaines après inoculation chez tous les oiseaux. Des anticorps neutralisant le CAA sont encore décelables chez tous les oiseaux inoculés 37 semaines après l'infection, correspondant à la fin de la période d'observation. Un des sérums d'oiseaux inoculés, testé par la technique ELISA, a donné des résultats positifs pendant la même période alors que la technique IFA n'a décelé les anticorps anti‐CAA que pendant neuf semaines. Concernant les sérums du terrain, la technique VN a permis de mettre en évidence davantage de sérums positifs que les techniques ELISA et IFA. Aucun anticorps CAA n'a été décelé chez les poulets SPF ave aucune des trois techniques. La technique IFA donne fréquemment des réponses faussement positives quand les sérums négatifs, avec la technique VN, sont testés à des dilutions inférieures ou égales à l/50è.

Zusammenfassung

Es wurden Vergleiche zwischen Virusneutralisations (VN)‐Test, indirektem Fluoreszenz (IFA)‐Test und ELISA hinsichtlich ihrer Empfindlichkeit für den Nachweis von Antikörpern gegen den Hühneranämie‐Erreger (CAA) angestellt. Seren von Hühnern, die im Alter von 11 Wochen mit CAA inokuliert worden waren, sowie Seren von spezifiziert pathogenfreien (SPF) Hühnerherden und von Elterntierherden aus der Praxis wurden untersucht. Eine Serokonversion wurde mit allen drei Tests bei sämtlichen inokulierten Tieren 2 bis 3 Wochen post inoculationem (p.i.) nachgewiesen. Neutralisierende Antikörper gegen CAA waren bei allen inokulierten Tieren noch 37 Wochen p.i., dem Ende der Beobachtungszeit, nachweisbar. Eins der sieben inokulierten Hühner lieferte im gleichen Zeitraum auch im ELISA positive Ergebnisse, während mit dem IFA‐Test nur 9 Wochen lang Antikörper gegen CAA festgestellt wurden. Bei den Feldseren wurden mit dem VN‐Test sehr viel mehr positive Proben gefunden als mit dem ELISA oder IFA‐Test. In Seren von SPF‐Hühnern ließen sich mit den drei Tests keine Antikörper gegen CAA nachweisen. Der IFA‐Test hatte häufig falsch positive Ergebnisse, wenn VA‐Antikörper‐negative Seren in Verdünnungen von ≤1:50 untersucht wurden.

Resumen

Se realizó una comparación entre las sensibilidades del método de neutralización viral (VN), el de immunofluorescencia indirecta (IFA) y el de enzimoinmunoensayo (ELISA) para la detección de anticuerpos del agente de la anemia del pollo (CAA). Se estudió el suero de pollos inoculados con CAA a las 11 semanas de vida y el de animales libres de patógenos específicos (SPF) y de grupos de pollos reproductores. Se detectó una seroconversión con las tres pruebas en todas las aves inoculadas entre las dos y tres semanas postinoculación (PI). Se demonstraron anticuerpos neutralizantes a CAA en todas las aves inoculadas hasta la semana 37 postinfección, que fue el límite del período de observación. Una de las siete aves inoculadas dió un resultado positivo por ELISA durante el mismo período, mientras que el método de IFA detectó anticuerpos anti CAA sólamente durante 9 semanas. En los sueros de campo, la prueba de VN demostró muchos más sueros positivos que la de ELISA e IFA. No se detectaron anticuerpos para CAA en el suero de pollos SPF con ninguno de los tres métodos. La prueba de IFA dió frecuentemente falsos resultados positivos cuando los sueros negativos por VN fueron estudiados a concentraciones iguales o inferiores a 1:50.