Detecting Bordetella avium in tracheal sections of turkeys by monoclonal antibody‐based indirect fluorescence microscopy

Summary

Formalin‐fixed and paraffin‐embedded tracheal sections from turkeys experimentally infected with Bordetella avium were subjected to indirect fluorescent staining using a mouse monoclonal antibody specific to B. avium. Tracheal sections from birds at 2, 3, 5 and 7 weeks after infection showed positive fluorescence. The results were compared with the bacterial numbers determined by a standard plate count method and suggested that the fluorescence test employing the monoclonal antibody was very sensitive in detecting the bacteria colonising the trachea. This technique was also found to be simple and specific for differentiating B. avium from closely related Bordetella bronchiseptica and B. avium‐like bacteria which might be present in the birds without causing apparent disease and from other agents that cause similar respiratory disease.

Resume

Des sections de trachée fixées au formol et incluses dans la paraffine à partir de dindes expérimentalement infectées avec Bordetella avium ont été soumises à coloration en fluorescence indirecte utilisant un anticorps monoclonal de souris spécifique de B. avium. Des sections de trachée des oiseaux à 2, 3, 5 et 7 semaines après infection ont montré une fluorescence positive. Les résultats ont été comparés au nombre de bactéries déterminé par une méthode standard de comptage en plaques qui suggère que le test de fluorescence utilisant un anticorps monoclonal est très sensible pour la détection de la colonisation bactérienne de la trachée. Cette technique s'est aussi révélée être simple et spécifique pour différencier B. avium d'autres Bordetella voisines, B. bronchiseptica et B. pseudo‐avium qui peuvent être présents chez les oiseaux sans entraîner de maladie apparente, ainsi que pour différencier B. avium d'autres agents qui causent les mêmes symptômes respiratoires.

Zusammenfassung

Formalinfixierte und in Paraffin eingebettete Tracheaschnitte von experimentell mit Bordetella avium infizierten Puten wurden unter Verwendung von B. avium‐spezifischen monoklonalen Maus‐Antikörpern einer indirekten Fluoreszenzfärbung unterzogen. Tracheaschnitte von Tieren 2, 3, 5 und 7 Wochen nach der Infektion ergaben positive Fluoreszenzreaktionen. Die Ergebnisse wurden mit den durch eine übliche Platten‐Keimzahlbestimmung ermittelten Bakterienzahlen verglichen and ließen darauf schließen, daß der Fluoreszenztest für den Nachweis der die Trachea besiedelnden Bakterien sehr empfindlich war. Diese Technik erwies sich außerdem als einfach und spezifisch für die Abgrenzung von B. avium gegenüber den nahe verwandten B. bronchiseptica und B. avium‐ähnlichen Bakterien, die in den Tieren vorhanden sein können, ohne eine apparente Erkrankung zu verursachen, und gegenüber anderen Erregern, die eine ähnliche Atemwegserkrankung verursachen.

Resumen

Se emplearon cortes de tráquea fijados en formol e encluidos en parafina procedentes de pavos infectados experimentalmente con Bordetella avium para detectar este antígeno mediante inmunofluorescencia indirecta, empleando un anticuerpo monoclonal obtenido en ratón frente a B. avium. Las muestras de tráquea procedentes de aves a los 2, 3, 5 y 7 semanas postinfección mostraron una fluorescencia positiva. Los resultados se compararon con el recuento bacteriano determinado mediante un método estándar de recuento de placa y sugirieron que el método de inmunofluorescencia empleado era muy sensible en la detección de bacterias colonizando la tráquea. Además esta técnica era sencilla y específica en la distinción entre B. avium y Bordetella bronchiseptica asi como otras bacterias similares a B. avium que pudieran encontrarse en las aves sin causar una enfermedad aparente y de otros agentes que producen procesos respiratorios similares.