Development and characterization of a nucleic acid probe for avian reoviruses

Abstract

A radiolabelled probe (S4–18), corresponding to 542 base pairs of the S4 genome segment of avian reovirus (ARV), was used in dot blot hybridization assays. The lowest limit of purified viral RNA detected was similar among three ARV strains and was 0.2 ng. The probe also detected nine heterologous strains of ARV RNA prepared directly from cell cultures, indicating that it had a broad specificity. In addition, the probe detected ARV RNA in tendon tissues of birds from commercial broiler raising farms following dot blot hybridization.

Résumé

Une sonde radioactive (S4–18) correspondant à 542 paires de base du segment génomique S4 du réovirus aviaire (ARV) a été utilisée dans des essais d'hybridation sur membrane (dot blot). La limite inférieure d'ARN viral purifié détecté est de 0,2 ng et est similaire pour les trois souches d'ARV étudiées. La sonde détecte également neuf souches hétérologues d'ARV, dont TARN a été préparé directement à partir de cultures cellulaires, indiquant que sa spécificité présente un spectre large. De plus, la sonde détecte l'ARN de l'ARV dans les tendons des poulets de chair par la technique d'hybridation en dot blot.

Zusammenfassung

Eine radioaktiv markierte Gensonde (S4–18), die 542 Basenpaaren des S4‐Genomsegments des aviaren Reovirus (ARV) entsprach, wurde für Dot‐Blot‐Hybridisierungstests verwendet. Die niedrigste nachweisbare Konzentration gereinigter Virus‐RNS war bei drei ARV‐Stämmen annähernd gleich und betrug 0,2 ng. Die Sonde eignete sich auch zum Nachweis von direkt aus Zellkulturen präparierter RNS von neun heterologen ARV‐Stämmen, was zeigte, daß sie eine umfassende Spezifität hatte. Außerdem entdeckte die Sonde nach der Dot‐Blot‐Hybridisierung ARV‐RNS in Sehnengeweben von Tieren aus kommerziellen Broiler‐Aufzuchtfarmen.

Resumen

Se utilizó una sonda radiomarcada (S4–18) con 542 pares de bases correspondientes a un segmento del genoma S4 del reovirus aviar (ARV) para la aplicación de técnicas de hibridación ‘dot blot’. La cantidad mínima de ARN vírico detectada fue similar en tres cepas de ARV, 0.2 ng. La sonda también detectó nueve cepas heterólogas de ARV preparadas directamente a partir de cultivos celulares, indicando que su espectro de especificidad era amplio. Además la sonda detectó ARN del ARV en tendones de aves procedentes de granjas de broilers, mediante hibridación ‘dot blot’.

Notes

*To whom correspondence should be addressed. Tel: [phone]. Fax: [phone].