Über eine kombinierte Methode zur Anreicherung und Isolierung von echt gelösten organischen Phosphorkomponenten aus natürlichem Wasser

Zusammenfassung

Natürliche Seewässer, auch mit kleinen Zusätzen von frisch abgetötetem und für einen Tag der Zersetzung überlassenem Zooplankton, wurden zur Entfernung der Partikel von mehr als 0,6 μ Durchmesser durch Membranfilter MF 50 filtriert. Das eigentliche Verfahren verläuft folgendermaßen: 1. Wiederholte Teil-Ausfriertechnik bei – 15° C gemäß Shapiro. — 2. Wiederholte Adsorption des ungefrorenen Konzentrates in einer kleinen Säule mit Amberlite IRA 400 in der Azetatform bei ±5°C. — 3. Wiederholte Elution von gebundenen Phosphorkomponenten mit kleinen Mengen (5–7 ml) 1 m CH₃COONH₄-Lösung unter Kühlung. — 4. Dekationisierung des Eluats durch Zugabe von Dowex 50 in H⁺-Form. — 5. Teilweise oder vollständige Eindampfung des dekationisierten Eluats unter Vakuum und Kühlung. — 6. Aufsteigende Dünnschidit-Chromato-graphie unter Kühlung mit einer Cellulose-Schidit MN 300 als stabile Phase und einem Gemisch von Aceton und 30%iger Essigsäure (7:3, v/v.) als mobile Phase.

Phosphorhaltige Flecken wurden mit Hanes-Isherwood-Reagenz und üblicher Nachbehandlung identifiziert. Zucker wurden durch Besprühen mit einer Lösung von Anilinphthalat und anschließendem Erhitzen auf 105° C bestimmt. Fünf (in manchen Fällen sechs) P-haltige Flecken sind unterscheidbar (Abb. 1), wovon der eine durch Orthophosphat bewirkt wird. Bei zwei anderen Flecken, die beide mit dem Hanes-Isherwood-Reagenz und Anilinphthalat reagieren, scheint es sich um Zuckerphosphate zu handeln. Über die chemische Natur der restlichen beiden oder drei Flecken können keine Angaben gemacht werden.

Summary

A combined method for concentration, separation and identification of truly dissolved organic phosphorus compounds was described. One liter of natural lake water (or water in which small amounts of freshly killed zooplankton were decomposed for one day) was filtered free of particles larger than 0,6 μ by means of membrane-filter MF 50. The procedure itself includes the following steps: (1) Multiplied partial freezing-out-technique at –15° C according to Shapiro. (2) Multiplied adsorption of the non-frozen concentrate at a small column of Amberlite IRA 400 in CH₃COO—-form at ±5°C. (3) Multiplied elution of bound phosphorus compounds with small volumes (5–7 ml) of 1 molar ammonium acetate solution, also under cooling. (4) Decationizing of the eluate by adding of Dowex 50 in H⁺-form. (5) Partial or total evaporation of the decationized eluate under vacuum and cooling. (6) Ascendent thin layer chromatography under cooling with a cellulosis layer of MN 300 as the stabile phase and a mixture of acetone — 30% acetic acid (7: 3, v/v) as the mobile phase.

Spots containing phosphorus compounds were identified with HANES-ISHERWOOD-reagent and its usual post-treatment. Sugars were detected by spraying with a solution of aniline phthalate and heating on 105° C.

Five (in some cases six) P-containing spots are detectible (fig. 1). One of these is caused by orthophosphate. In two other spots, both reacting with Hanes-Isherwood- reagent and aniline phthalate, sugar phosphates seem to be present. — No informations can be given until now for the chemical nature of the remaining two or three spots.