Direct amplification by PCR of DNA from ungerminated teliospores of Tilletia species

Abstract

A simple technique of conducting polymerase chain reaction (PCR) on single ungerminated teliospores of Telleria species was developed. Teliospores were manually cracked under a stereo microscope prior to adding to the PCR reaction mixture. Amplification product was obtained using primers for either a portion of the nuclear ribosomal intergenic spacer region or a portion of the mitochondria) DNA. Collections of teliospores from Tilletia indica, Tilletia barclayana, Tilletia controversa, Tilletia tritici, Tilletia laevis and an unidentified Tilletia sp, from Lolium varied in the proportion of spores from which amplification product could be detected, with the success rate ranging from 100 to 10%. This technique avoids the difficulty and time delay in having to germinate teliospores prior to extracting DNA from a mycelial matte and thus will be of great value in the application of PCR methods for regulatory testing and phylogenetic studies of Tilletia species.

Résumé

La technique simple que nous avons mis au point permet d′utiliser la réaction en chaîne catalysée par la polymérase ( « PCR ») avec des téliospores isolées, non germées, de Tilletia spp. Cette technique consiste à briser manuellement la paroi des téliospores, sous un microscope binoculaire, puis des ajouter au mélange réactif servant à la PCR. Les produits d′amplification sont obtenus au moyen d′amorces correspondant soit à une portion de la séquenced′ espacement séparant les génes codant pour I′ ARN ribosomique, soit à une portion de I′ ADN mitochondrial. La proportion de spores ayant donné des quantités détectables de produits d′amplification variait de 10 à 100%, seton les collections de spores, qui appartenaient aux espèces Tilletia indica, Tilletia barclayana, Tilletia controversa, Tilletia tritici et Tillletia laevis ainsi qu′à un Tilletia sp. non identifié prélevé sur un Lolium. La technique permet d′éviter les difficultés et les retards liés à I′ obligation de faire germer Jes téliospores pour pouvoir ensuite extraire I′ ADN du tapts mycélien. Elle sera done trés utile pour appliquer la technologie de la PCR aux essais réglementaires et aux études phylogeniqués portant sur les Tilletia.

Key words:

• Tilletia
• PCR
• teliospore

Mots clés:

• Tilletia
• la réaction en chaîne catalysée par la polymérase
• téliospore