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Abstract
Graft inoculation of potato (Solanum tuberosum) ‘Shepody’ plants with Potato virus A (PVA) results in hypersensitive resistance responses (HR) in tubers with characteristic necrosis. Increasing the number of PVA-containing scions or increasing the duration of scions on the ‘Shepody’ rootstock plants resulted in an increased number of tubers showing necrosis. Transgenic ‘Shepody’ plants with a sense or an antisense copy of PVA coat protein (CP) gene under the direction of the CaMV 35S promoter were developed. The plants were subjected to graft inoculation with PVA in the greenhouse and were monitored by detecting PVA using enzyme-linked immunosorbent assays and reverse transcriptase polymerase chain reaction during the growing season. No PVA was detected in the wild type or the antisense-CP transgenic lines. However, PVA was detected from one of the two sense-CP transgenic lines. Potato tubers from graft-inoculated plants were harvested 3 months after inoculation and were examined for necrosis. In the experiments carried out in the greenhouse, approximately 76% of tubers from wild-type plants showed necrosis, as did 43%-84% of tubers from the antisense PVA-CP lines. However, except for one, all tubers (130 in total) from the sense PVA-CP lines were necrosis free, indicating that the PVA-CP transgene suppresses the PVA-mediated HR.
Résumé
L'inoculation par greffe de plants du cultivar ‘Shepody’ avec le virus A de la pomme de terre entraîne des réponses hypersensibles (HR) caractérisées par la présence de nécroses typiques sur le tubercule. L'augmentation du nombre de greffons infectés par le PVA, ou le maintien prolongé des greffons sur les porte-greffes ‘Shepody’, a provoqué une augmentation du nombre de tubercules nécrosés. Des plants transgéniques de ‘Shepody’ possédant une copie sens ou antisens du gène de la protéine de coque (CP) du PVA ont été produits en utilizant le promoteur CaMV 35S. Les plants ont été inoculés par greffe en serre avec le PVA et suivis, durant la saison de croissance, par détection du virus à l'aide de la détection immunoenzymatique et la technique transcription inverse—réaction en chaîne de la polymérase. Aucun PVA n'a été détecté dans les lignées de type sauvage ou transgéniques antisens-CP. Par ailleurs, le PVA a été détecté dans une des deux lignées transgéniques sens-CP. Les tubercules inoculés par greffe ont été récoltés trois mois après avoir été inoculés et ont été examinés dans le but d'y déceler de la nécrose. Environ 76 % des tubercules de type sauvage élevés en serre affichaient de la nécrose, tout comme 43 % à 84 % de ceux issus des lignées PVA-CP antisens. Par contre, sauf pour une lignée, tous les tubercules (130 en tout) des lignees PVA-CP sens étaient sains, ce qui montre que le transgène PVA-CP supprime la réponse hypersensible médiée par le PVA.