Dosage D’Activites Enzymatiques. Apercu Des Principes Methodologiques Du Dosage D'Activites Enzymatiques

Summary

Measurement of enzyme activity is based on proportionality between reaction rate and enzyme concentration.

Possible causes of error are analysed : artefacts, presence of inhibitors in the substrate or the enzyme preparation, effects of temperature and pH, activator ions.

In some cases evaluation of the saturating concentration in substrate is difficult or impossible.

Resume

La proportionnalité entre vitesse de réaction et concentration enzymatique est la base de tout dosage d'activité enzymatique. Les causes possibles d'un défaut de proportionnalité sont analysées. Des artéfacts dans le processus de dosage, la présence d'inhibiteurs dans le milieu réactionnel ou dans la préparation enzymatique ainsi que des effets de pH et température sont autant de causes de non-linéarité de la relation V=k(E) normalement observée à saturation de substrat. L'intervention d'ions activateurs est envisagée.

La concentration saturante en substrats est évaluée par rapport au K_M ; la détermination de cette constante spécifique de l'enzyme peut être difficile voir impossible dans plusieurs cas : ceux-ci font l'objet de la deuxième partie de cet exposé.

Samenvatting

Enzym concentratie bepaling steunt op de verhouding tussen reactie snelheid en enzymconcentratie.

Mogelijke fout-oorzaken worden besproken : artefakten, aanwezigheid van inhibitoren in substraat of enzympreparaten, invloed van temperatuur, pH of ionenconcentratie.

In sommige gevallen is het moeilijk zoniet onmogelijk de verzadigende substraatconcentratie te bepalen.