Determination of Yeast Viability Using Fluorophores

Abstract

The assessment of pitching and cropping yeast viability and vitality is important in attaining adequate fermentation performance. Methylene blue remains an industry standard for viability assessment, even though the efficiency of this stain is highly controversial. It has been suggested that methylene violet might provide a more accurate and reproducible assessment of viability than does methylene blue because of impurities in the latter. The objective of this study was to identify an alternative viability assessment to brightfield reductive dye techniques using fluorophores. Viability studies were performed on yeast cell populations exhibiting different viabilities and stresses. Viability was determined using fluorophore dyes, such as oxonol (DiBAC₄(3)), 1-anilino-8-naphtalene-sulfonic acid (MgANS), berberine, Sytox Orange, propidium iodide, FUN1, and conventional brightfield dyes, such as methylene violet. It was observed that oxonol successfully distinguished between live and dead cells without ambiguity. In addition, with the exception of FUN1, fluorophore staining was perceived to be less subjective to the operator compared with brightfield dye staining because of the lack of intermediate color variations.

RESUMEN

Poder evaluar la viabilidad y la vitalidad de las refloculaciones y el cultivo de levadura es importante en lograr el funcionamiento adecuado en la fermentación. El metileno azul sigue siendo un estándar en la industria de evaluación de viabilidad, aunque hay mucha controversia en eficiencia de este marcador. Se ha sugerido que el metileno violeta puede proporcionar una evaluación de viabilidad más exacta y con más reproducibilidad que el metileno azul debido a impurezas en el azul. El objetivo de este estudio era identificar una evaluación alternativa de viabilidad a las técnicas reductoras de tinte brightfield usando fluorophores. Estudios de viabilidad fueron realizados en poblaciones de células de levadura que exhibían diversas viabilidades y tensiones. La viabilidad fue determinada usando tintes de fluorophore, tales como oxonol (DiBAC₄(3)), el ácido 1-anilino-8-naphtalene-sulfonic (MgANS), berberine, Sitox Orange, yoduro propidium, FUN1, y tintes convencionales brightfield, tal como metileno violeta. Se observo que el oxonol distinguió con éxito entre las células vivas y muertas sin ambigüedad. Adicionalmente, con excepción de FUN1, la tinción fluorophore fue percibida ser menos subjetiva al operador en comparación a la tinción brightfield debido a la carencia de variaciones intermedias de color.

• Brewing yeast
• Dyes

Palabras clave:

• Levadura cervecera
• Tintes