Application of monoclonal antibodies in the avian leukosis virus GS‐antigen ELISA

Summary

Five hybridoma cell lines which secrete antibodies to avian leukosis/ sarcoma (ALV) group‐specific (gs) antigens (gag gene products) have been established. The hybrid cells resulted from fusion of P3/X63‐Ag8.653 myeloma cells with splenocytes of BALB/c mice which had been immunised with purified avian myeloblastosis virus (AMV).

Screening of supernatant fluids was performed by an indirect double antibody sandwich enzyme‐linked immunosorbent assay (IDAS‐ELISA) and the immunoelectroblotting technique. Three hybrid clones secrete monoclonal antibodies (MCA) to 27,000 dalton polypeptides (p27) and two hybridomas produce monoclonal antibody directed to 19,000 dalton phosphoprotein (pp19). All five monoclonal antibodies belong to mouse immunoglobulin isotype IgG₁. MCAs directed to different ALV‐p27 epitopes can replace polyclonal rabbit or hamster anti‐gs sera in the DAS‐ELISA in use for the detection of congenitally ALV‐shedding hens. In albumen samples a 16‐ to 32‐fold increase of sensitivity of ALV gs‐antigen detection was obtained as compared to the DAS‐ELISA employing polyclonal sera. Gs‐antigens of a purified AMV preparation were detectable up to minimal concentrations of 13 pg/ml.

Resume

Cinq hybridomes de lignées cellulaires sécrétant des anticorps vis‐à‐vis de l'antigène gs, spécifique de groupe du virus de la leucose/sarcome aviaire (ALV) (produit gag gène) ont été établis. Les cellules hybrides résultent de la fusion de cellules de myélome P3/X63‐Ag8.653 avec des splénocytes de souris BALB/c qui ont été immunisées avec le virus purifié de la myéloblastose aviaire (AMV).

Le screening des liquides surnageants a été réalisé par la technique immuno‐enzymatique indirecte sandwich double anticorps (IDAS‐ELISA) et la technique immuno‐électro blotting (électrophorèse d'une prise d'empreintes suivie d'une détection par anticorps marqués). Trois clones hybrides ont sécrété des anticorps monoclonaux (MCA) vis‐à‐vis de polypeptides de 27000 daltons (p27) et deux hybridomes ont produit des anticorps monoclonaux dirigés contre une phospho‐protéine de 19000 daltons (pp19). Tous les cinq anticorps monoclonaux appartenaient à l'isotype d'immuno‐globulines de souris IgG₁. Les anticorps monoclonaux dirigés vis‐à‐vis des différents épitopes ALV‐p27 peuvent remplacer les sérums polyclonaux de lapin ou de hamster anti‐gs dans le DAS‐ELISA pour la détection des poules disséminant congénitalement l'ALV. Dans les échantillons d'albumen, une augmentation de la sensibilité de 16 à 32 fois supérieure dans la détection de l'antigène gs ALV, a été obtenue, comparativement à la technique DAS‐ELISA employant les sérums polyclonaux. L'antigène gs d'une préparation purifiée d'AMV a été décelable jusqu'à un minimum de concentration de 13 pg/ml.

Zusammenfassung

Fünf Hybridoma‐Zellinien, welche Antikörper gegen die aviären Leukose/Sarkom (ALV)‐gruppen‐(gs)‐Antigene (gag Genprodukte) sezernieren, wurden errichtet. Die Hybridzellen sind das Ergebnis einer Fusion von P3/X63‐Ag8.653 Myelom‐zellen mit Splenocyten von BAB/c Mäusen, welche mit gereinigtem aviaren Myleo‐blastosevirus (AMV) immunisiert waren.

Die Zellüberstände wurden mit dem indirkten doppelten Antikörpersandwich‐Enzymimmunosorbenttest (IDAR‐ELISA) und der Immuno‐Elektrolöschtechnik untersucht. Drei Hybridklone schieden monoklonale Antikörper (MCA) gegen 27,000 Daltons Polypeptide (p27) aus und zwei Hybridoma produzierten monoklonale Antikörper gegen 19,000 Daltons Phosphorproteine (pp19). Alle fünf monoklonalen Antikörper gehören zum Mäuseimmunoglobulinisotyp IgG₁ MCAs gegen verschiedene ALV‐p27 Epitope können polyklonale Kaninchen‐ oder Ham‐ster‐anti‐gs‐Sera, die beim DAS‐ELISA zur Erkennung kongenital ALV‐ausscheiden‐der Hennen Verwendung finden, ersetzen. In Eiweiβproben wurde im Vergleich zur Durchführung des DAS‐ELISA mit polyklonalen Seren eine 16‐ bis 32‐fache stärkere Empfindlichkeit beim ALV gs‐antigennachweis festgestellt. Gs‐Antigene einer gereinigten AMV Praeparation waren bis zu einer Minimumkonzentration von 13 pg/ml nachweisbar.

Resumen

Se establecieron cinco líneas de células hibridoma, las cuales secretaron anticuerpos contra los antígenos (gag productos gene) de grupo‐específicos (gs) del virus de la leucosis aviar/sarcoma (ALV). Las células híbridas fueron el resultado de la fusión de células mieloma P3/X63‐Ag 8.653 con esplenocitos de ratones/BALB, los cuales habían sido inmunizados con virus purificados de la mieloblastosis aviar (AMV).

Se llevó a cabo un monitoreo de los fluidos por medio de la prueba doble indirecta de anticuerpos sandwich y el ensayo inmunoabsorbente fijado a enzima (IDAS‐ELISA) y la técnica de inmuno‐electrosecado. Tres clones híbridos secretaron anti‐cuerpos monoclonales (MCA) a 27,000 polipeptidos dalton (p27) y dos hibri‐domas produjeron anticuerpos monoclonales dirigidos a 19,000 fosfoproteínas dalton (pp 19). Los cinco anticuerpos monoclonales pertenecen a la inmunoglo‐bulina de raton isotipo IgG₁. Los anticuerpos monoclonales dirigidos contra diferentes virus de la leucosis/sarcoma aviar p27 epitopos pueden ser reemplazados por sueros policlonales de conejo o suero anti‐gs de hamster en la prueba de DAS‐ELISA en uso para detección de gallinas que congenitamente eliminan virus de leucosis/sarcoma aviar. En las muestras de albúmina en la dilución 16 a 32 aumenta la sensibilidad en la detección de los virus de leucosis/sarcoma y antígeno‐gs cuando se comparó con las pruebas DAS‐ELISA empleando sueros policlonales. Los anti‐genos‐gs de una preparación purificada de virus de la leucosis/sarcoma, fueron detectables en concentraciones tan mínimas como 13 pg/ml.