Laryngotracheitis (gallid‐1) herpesvirus infection in the chicken 4. latency establishment by wild and vaccine strains of ILT virus

Summary

Tracheal organ culture (TOC) techniques utilising multiple‐well plastic trays were used to detect and assay latent infection established by infectious laryngotracheitis (ILT) herpesvirus in clinically normal chickens. Between 3 and 16 months after tracheal exposure to wild strain (CSW‐1, haemorrhagic tracheitis) ILT virus and 2 to 10 months after exposure to vaccine strain ILT (SA‐2), groups of chickens were examined for evidence of infection.

Neither the examination of tracheal swabbings in monolayer cell cultures nor the inoculation of tracheal tissue suspensions detected virus, and this result was not influenced by preliminary immunosup‐pressive treatment of the birds with cyclophosphamide or dexametha‐sone. Latent infection was detected, however, by TOC in 6 (38%) of 16 chickens 100 days to 15 months after exposure to wild strain ILT virus and in 4 (44%) of 9 chickens 2 to 10 months after exposure to the vaccine strain. These data provide the first proof that both wild and vaccine strains of ILT virus regularly establish long term latent infections.

Sites of establishment of latent infection in the trachea were highly focal in distribution. Virus reactivation was demonstrated in only 20 (8.3%) of the TOC preparations established from previously infected chickens and usually from only one or two sites in each trachea. Both strains of ILT virus exhibited characteristics of latency in vitro in that virus was not detectable in supernatant fluids until 5 to 6 days after establishment of TOC. Virus shedding then usually continued for 1 to 2 weeks 10² to 10⁴ PFU/ml being produced each 2 to 3 days. In some preparations, virus production continued for up to 30 days.

Resume

La technique de cultures des organes de trachée (TOC) réalisée en plaque plastique à puits multiples a été utilisée pour détecter et étudier l'infection latente par l'herpès virus de la laryngotrachéite infectieuse (ILT) chez des poulets cliniquement normaux. Entre 3 et 16 mois après exposition par voie trachéale à une souche sauvage (CSW‐1, hémorragie trachéale) de virus ILT et 2 à 10 mois après exposition à une souche vaccinale ILT (SA‐2), les groupes de poulets ont été observés pour la mise en évidence de l'infection.

Aucun des écouvillonnages trachéaux examinés sur tapis cellulaires, pas plus que l'inoculation des tissus trachéaux, n'ont permis de détecter le virus et ce résultat n'a pas été modifié par un traitement imuno dépressif préliminaire des oiseaux avec la cyclophosphamide ou le dexamethasone. L'infection latente a par contre été détectée à l'aide des TOC chez 6 (38%) des 16 poulets 100 jours à 15 mois après l'exposition à la souche sauvage de virus ILT et chez 4 (44%) des 9 poulets 2 à 10 mois après exposition à la souche vaccinale. Ces données apportent la première preuve qu'à la fois les souches sauvages et vaccinales des virus ILT sont régulièrement responsables d'une infection latente à long terme.

Les sites d'établissement de l'infection latente dans la trachée ont une distribution hautement focale. La réactivation du virus a été démontrée dans seulement 20 (8.3%) des préparations de TOC établies à partir des poulets infectés au préalable et en général à partir d'un ou deux sites dans chaque trachée.

Les deux souches de virus ILT ont montré des caractéristiques de latence in vitro dans la mesure où le virus n'a pas été détecté dans les liquides surnageants jusqu'à 5 à 6 jours après l'établissement des TOC.

La propagation du virus a ensuite continué généralement pendant 1 ou 2 semaines avec production de 10² à 10⁴ PFU/ml tous les 2 à 3 jours. Dans quelques cas la production a continué jusqu'à 30 jours.

Zusammenfassung

Die Trachealorgankulturtechnik (TOC) in mehrlöcherigen Plastiktabletts wurde verwendet um latente Infektionen durch infektiöses Laryngotracheitisherpesvirus (ILT) in klinisch normalen Hühnern zu entdecken und zu untersuchen. Hühnergruppen wurden zwischen 3 und 16 Monaten nach trachealer Infektion mit einem Wildstamm (CSW‐1, haemorrhagische Tracheitis) ILT Virus und 2 bis 10 Monate nach Inokulation eines Impfstamm ILT (SA‐2) auf Zeichen einer Infektion untersucht.

Weder durch die Untersuchung von Trachealspülproben in Monolayerzellkulturen noch durch die Inokulation von Trachealgewebesuspensionen konnte Virus nachgewiesen werden. Das Ergebnis wurde durch eine vorausgehende immunosup‐pressive Behandlung der Tiere mit Cyclophosphamid oder Dexamethason nicht beeinflußt. Eine latente Infektion wurde jedoch mit TOC in 6 (38%) von 16 Hühnern 100 Tage bis 15 Monate nach Infektion mit einem Wildstamm ILT Virus und in 4 (44%) von 9 Hühnern 2 bis 10 Monate nach Infektion mit einem Vakzinestamm entdeckt. Diese Daten liefern den ersten Beweis, daß sowohl wilde als auch Vakzinestämme des ILT Virus regelmäßig zu latenten Langzeitinfektionen führen. Die Stellen, wo die latente Infektion in der Trachea stattfand, waren fokal verteilt. Eine Virusreaktivierung erfolgte nur bei 20 (8.3%) der TOC Prae* parate aus vorher infizierten Hühnern und gewöhnlich nur an 1 oder 2 Stellen jeder Trachea. Beide Stämme des ILT Virus zeigten in vitro Latenzeigenschaften so z.B., daß das Virus in der überstehenden Flüssigkeit bis 5 bis 6 Tage nach TOC Praeparation nicht nachweisbar war. Die Virusausscheidung dauerte dann gewöhnlich 1 bis 2 Wochen an, wobei alle 2 bis 3 Tage 10² bis 10⁴ PFU/m1 produziert wurden. In einigen Praeparationen hielt die Virusproduktion bis zu 30 Tagen an.

Resumen

Se usaron técnicas de cultivo de tejidos traqueales (CTT) en placas de plástico con pozoz múltiples para detectar y evaluar la infección latente establecidas por el virus herpes de la laringotraqueitis infecciosa (LTI) en pollos clínicamente normales. Se examinaron grupos de pollos de 3 a 16 meses después la exposición traqueal con una cepa de campo (Traqueitis hemorrâgica CSW‐1) del virus de la LTI y de 2 a 10 meses después de la exposición con la cepa vacunal de la LTI (SA‐2) con el objeto de buscar evidencias de infección.

Ni el examen por medio de hisopos traqueales en monocapas de cultivo de tejidos, ni la inoculación en suspensiones de tejido traqueal pusieron de manifiesto al virus, además este resultado no fue influenciado por el tratamiento preliminar immunosupresivo de las aves con ciclofosfamida o dexametasona. Sin embargo, la infección latente fue detectada por CTT en 6 (38%) de los 16 pollos de 100 días a 15 meses después de la exposición a una cepa de campo del virus de la LTI y en 4 (44%) de 9 pollos de 2 a 10 meses después de la exposición a una cepa vacunal. Estos datos son la primera prueba de que tanto las cepas de campo como las cepas vacunales del virus de la LTI establecen regularmente infecciones latentes a largo término.

Los lugares de establecimiento de la infección latente en la tráquea fueron altamente focales en su distribución. La reactivación del virus fue demostrada en solamente 20 (83%) de las preparaciones de CTT establecidas previamente.

Ambas cepas del virus de la LTI mostraron características de latencia in vitro en aquellos virus que no fueron detectados en los fluidos sobrenadantes hasta 5 a 6 días después del establecimiento de CTT. La excreción de virus continuó usual‐mente durante 1 a 2 semanas, habiéndose producido 10²‐10⁴ UFP/ml cada 2 a 3 días. En algunos cultivos la producción de virus continuó hasta los 30 días.