Serial propagation and purification of chicken Anaemia agent in mdcc‐MSB1 cell line

Summary

The TK‐5803 strain of an agent which induces chicken anaemia was propagated and titrated in cultures of the MDCC‐MSB1 cell line. When the isolates (tentatively designated MSBI‐TK‐5803 strain) from the original material were inoculated into 1‐day‐old susceptible chicks, they showed a severe pathogenicity, inducing anaemia with aplasia of the bone marrow and atrophy of the lymphoid organs. On density gradient separation, the peak of their infectivity titre appeared at a density of 1.35 to 1.36 g/cm³ and numerous virus particles were demonstrated in the same fraction. The agent was resistant to heating for 30 min at 60°C and 50% chloroform for 15 min at 4°C, and passed through a 25 nm membrane filter, but it was completely inactivated after heating for 30 min at 70°C or more. The purified virus particles were spherical or hexagonal in shape and 19.1 ± 0.2 nm in diameter.

Resume

La souche TK‐5803 de l'agent induisant une anémie chez le poulet a été propagée et titrée sur culture de la lignée cellulaire MDCC‐MSB1. Quand les souches isolées à partir des prélèvements d'origine désignées MSB1‐TK‐5803, ont été inoculées à des poussins d'un jour sensibles, elles ont montré un pouvoir pathogène important se traduisant par de l'anémie avec aplasie de la moelle osseuse et atrophie des organes lymphoïdes. En gradient de densité, le pic du titre infectieux est apparu à la densité de 1,35 â 1,36 g/cm³ et de nombreuses particules virales ont été observées dans la même fraction. L'agent était résistant à la chaleur pendant 30 minutes à 60°C et au chloroforme à 50% pendant 15 minutes â 4°C; il traversait les filtres d'un diamètre de pore de 25 nm, mais était complètement inactivé après chauffage pendant 30 minutes à 70°C et plus. Les particules virales purifiées étaient de forme sphérique ou hexagonal et de diamètre de 19,1 ± 0,2 nm.

Zusammenfassung

Der TK‐5803 Stamm eines Agens, das Kükenanaemie verursacht, wurde in Kulturen der MDCC‐MSB1 Zellinie vermehrt und titriet. Wenn die Isolate (vorläufig als MSB1‐TK‐5803 Stamm bezeichnet) aus dem Originalmaterial in empfängliche Eintagsküken inokuliert wurden, erwiesen sie sich als äußerst pathogen, induzierten Anaemie mit Aplasie des Knochenmarkes, sowie Atrophie der lymphatischen Organe. Bei der Dichtegradiententrennung erschien der höchste Infektionstiter bei einer Dichte von 1,35 bis 1,36 g/cm³. In dieser Fraktion konnten auch zahlreiche Viruspartikel nachgewiesen werden. Das Agens war resistent 30 Min. gegen Erhitzen auf 60°C und 15 Min. gegen 50% Chloroform bei 4°C und ging durch ein 25 nm Membranfilter. Es wurde aber nach 30 Min. Erhitzen auf 70 C und mehr vollständig inaktiviert. Die gereinigten Viruspartikel hatten eine sphärische oder hexagonale Form und einen Durchmesser von 19,1 ± 0,2 nm.

Resumen

La cepa TK‐5803 del agente casual de la anemia de los pollos fue cultivada y titulado en cultivos de la línea celular MDCC‐MSB1.

Cuando los aislamientos (tentativamente denominado MSB l‐TK‐5803) del material original fueron inoculados en pollitos susceptibles de un día de edad, ellos mostraron una severa patogeneidad induciendo anemia con aplasia de la medula osea y atrofia de los organos linfoides. En la separación de densidad gradual, el peco de su infectividad apareció en la densidad de 1.35 a 1.36 g/cm³ y numerosas partículas Víricas fueron observadas en la misma fracción. El agente fue resistente al calor durante 30 minutos a 60° y al cloroformo al 50% durante 15 minutos a 4°C y fue capaz de pasar a traves del filtro de 25 nm sin embargo fue completamente inactivado despues de su calentamiento durante 30 minutos a 70° C o más.

Las partículas de virus purificado eran de forma esférica o hexagonal con un diametro 19.1 ± 0.2 nm.