A comparison of three serological methods to detect chicken and turkey antibodies to avian nephritis virus and the use of virus‐specific monoclonal antibodies

Summary

Avian nephritis virus (ANV) strain G‐4260 was inoculated orally in to 1‐day‐old and 3‐week‐old chickens and the sequential antibody response to the virus was monitored by serum neutralization, ELISA and immunofluorescence tests. The order of sensitivity of the serological tests was in the sequence given above, with the neutralization test being by far the most sensitive. There was no obvious difference in the antibody titres produced by either age group. Virus was recovered from kidney tissue, the highest titres being obtained 3 to 5 days post‐inoculation. Histological examination revealed mainly lymphocytic infiltration of the interstitium and degenerative changes in the tubular epithelium of the kidney. The G‐4260 strain of ANV was given orally to 1‐day‐old turkey poults, but no serological response was induced. Virus was not recovered from the kidneys and no histological lesions were produced in this organ. Monoclonal antibodies were produced which neutralized the infectivity of ANV. An antigen trap ELISA was developed using a monoclonal antibody and infected chicken kidney tissue cultures. However, this assay did not detect ANV in kidney samples taken directly from infected chickens, with the exception of one sample which was shown to contain the highest concentration of infectious virus.

Resume

La souche G‐4260 du virus de la néphrite aviaire (VNA) a été inoculé par voie orale à des poussins d'un jour et à des poulets de 3 semaines. La réponse séquentielle des anticorps au virus a été contrôlée par les tests de séro‐neurralisation, ELISA et immunofluorescence. L'ordre de sensibilité des tests sérologiques suit celui des techniques mentionnées cidessus. Le test de neutralisation est de loin le plus sensible. Il n'y a pas de différence significative entre les titres d'anticorps produits par chaque groupe d'âge. Le virus a été détecté dans les tissus rénaux; les titres les plus élevés ont été obtenus 3 à 5 jours après inoculation. Un examen histologique a révélé principalement une infiltration interstitielle lymphocytaire et une dégénérescence de l'épithélium tubulaire du rein. La souche G‐4260 du VNA a été administrée

oralement à des dindonneaux d'un jour. Il n'y a eu aucune réponse sérologique. Le virus n'a pas été décelé dans les reins qui ne présentaient aucune lésion histologique. Des anticorps monoclonaux ont été produits, qui neutralisaient le pouvoir infectieux du VNA. Un test ELISA par capture a été mis au point en utilisant un anticorps monoclonal et des cultures tissulaires de reins de poulets infectés. Toutefois, ce test n'a pas permis d'isoler le VNA dans les échantillons de reins prélevés directement chez les poulets infectés, à l'exception d'un seul qui contenait la concentration la plus élevée de virus infectieux.

Zusammenfassung

Aviäres Nephritisvirus (ANV) vom Stamm G‐4260 wurde Eintagsküken und drei Wochen alten Küken oral verabreicht, und der Verlauf der Antikörperbildung gegen das Virus wurde mit Serumneutralisations‐, ELISA‐ und Immunfluoreszenztests verfolgt. Die Reihenfolge der Empfindlichkeit der serologischen Tests entsprach der oben genannten Reihenfolge, wobei der Neutralisationstest bei weitem am empfindlichsten war. Es gab hinsichtlich der Höhe der Antikörpertitter keinen klaren Unterschied zwischen den beiden Altersgruppen. Virus wurde aus Nierengewebe reisoliert, mit den höchsten Titern 3–5 Tage nach der Inokulation. Histologische Untersuchungen zeigten hauptsächlich eine lymphozytäre Infiltration des Inter‐stitiums und degenerative Veränderungen im Tubulusepithel der Niere. Der ANV‐Stamm G‐4260 wurde eintägigen Putenküken oral verabreicht, bewirkte jedoch keine serologische Reaktion. Aus den Nieren ließ sich kein Virus isolieren, und histologische Veränderungen wurden in diesem Organ nicht erzeugt.

Es wurden monoklonale Antikörper hergestellt, welche die ANV‐Infektiosität neutralisierten. Ein Antigen‐Capture‐ELJSA wurde unter Verwendung eines monoklonalen Antikörpers und infizierter Kükennieren‐Zellkulturen entwickelt. Mit diesem Test ließ sich jedoch ANV in frischen Nierenproben infizierter Küken nicht nachweisen, außer in einer Probe mit der höchsten Konzentration von infektiösem Virus.

Resumen

La cepa G‐4260 del virus de la nefritis aviar (ANV) fue inoculada oralmente en pollitos de uno día a tres semanas de edad, estudiándose la respuesta serológica al virus mediante seroneutral‐ización, ELISA e inmunofluorescencia. El orden de sensibilidad de los métodos empleados es el indicado previamente, siendo la seroneutralización el más sensible con mucho. No existieron diferencias obvias en los títulos de anticuerpos producidos por los diferentes grupos de edad. El virus se recuperó de los riñones, obteniéndose los títulos más elevados 3–5 días post inoculación. El examen histológico reveló principalmente una infiltración linfocítica del intersticio y cambiuos degenerativos en el epitelio tubular de los riñones. La cepa G‐4260 fue administrada oralmente a pavipollos de un día de edad aunque no indujo una respuesta serológica. No se recuperó virus de los ríñones y no se observaron lesiones histopatológicas en este órgano. Se produjeron anticuerpos monoclonales que neutralizaron la infectividad del ANV. Se desarrolló un ELISA de caoptura del antígeno empleando antoicuerpos monoclonales

y cultivos infectados de tejido renal de pollo. No obstante, este método no detectó ANV en las muestras de pollo tomadas directamente de los pollos infectados, con la excepción de una muestra que contenía la concentración máselevada de virus infeccioso.