A comparison of direct electron microscopy, virus isolation and a DNA amplification method for the detection of avian infectious laryngotracheitis virus in field material

Summary

Seventy‐two post‐mortem samples of mainly tracheal tissue from commercial chickens from 25 commercial chicken flocks with suspected infectious laryngotracheitis (ILT) were examined for the presence of the virus using direct electron microscopy (EM), virus isolation (VI) in primary chick embryo liver cell culture and a DNA amplification method (polymerase chain reaction; PCR). ILT virus was identified in 22 outbreaks, and in 58 of the 72 specimens. PCR detected virus in 52 of the 72 specimens and VI was positive in 48. In five instances, VI was positive where the other methods were negative and in three, PCR was the only test positive. Direct EM examination detected virus in only 19 of the 58 positive samples and in no case was EM the only method positive. An advantage of PCR was that it could sometimes detect virus in samples that were too heavily contaminated with bacteria for virus to be isolated and on other occasions it was positive for ILT virus when the only virus that could be detected by growth in tissue culture was adenovirus.

Resume

Soixante dix échantillons, après examen nécropsique, provenant principalement de tissus trachéaux de poulets de chair appartenant à 26 troupeaux commerciaux suspectés de laryngo‐trachéite infectieuse (ILT) ont été examinés pour la présence du virus en utilisant la micro‐scopie électronique directe (EM), l'isolement viral (VI) sur culture primaire de cellules de foie d'embryon de poulet et l'amplification de l'ADN (PCR). Le virus ILT a été identifié dans 22 troupeaux et sur 58 des 72 échantillons. La PCR a détecté le virus dans 52 des 72 échantillons et la VI a été positive dans 48. Dans cinq cas, la VI a été positive alors qu'avec les autres méthodes les résultats étaient négatifs et dans trois cas la PCR a été seule positive. L'examen direct EM a détecté le virus dans seulement 19 des échantillons positifs et en aucun cas, l'EM a donné un résultat seul positif. L'avantage de la PCR est de permettre la détection du virus dans les échantillons trop contaminés par les bactéries pour pouvoir isoler le virus et par ailleurs elle est positive pour le virus ILT quand le seul virus détecté en culture de tissus était un adenovirus.

Zusammenfassung

Zweiundsiebzig bei Sektionen entnommene Gewebeproben, hauptsächlich Tracheagewebe, von Hühnern aus 25 kommerziellen Herden mit Verdacht auf infektiöse Laryngotracheitis (ILT) wurden mit Hilfe der direkten Elektronenmikroskopie (EM), Virusisolierung (VI) in primären Hühnerembryo‐Leberzellkulturen und einer DNS‐Amplifizierungsmethode (Poly‐merase‐Kettenreaktion; PCR) auf das Vorhandensein des Virus untersucht. ILT‐Virus wurde bei 22 Ausbrüchen bzw. in 58 der 72 Proben nachgewiesen. Mit der PCR wurde in 52 der 72 Proben Virus festgestellt, und die VI war bei 48 Proben positiv. In fünf Fällen war nur die VI und in drei Fällen nur die PCR positiv. Mit der direkten EM ließ sich nur in 19 der 58 positiven Proben Virus nachweisen, und in keinem Fall war EM die einzige positive Nachweismethode. Ein Vorteil der PCR war, daß sich mit ihr manchmal Virus in Proben feststellen ließ, die für eine Virusisolierung zu stark bakteriell kontaminiert waren, und bei anderen Gelegenheiten war sie ILT‐Virus‐positiv, wenn das einzige Virus, das durch Anzüchtung in Zellkulturen nachgewiesen werden konnte, ein Adenovirus war.

Resumen

Se examinaron 72 muestras postmortem de tejido traqueal de pollos procedentes de 25 granjas comerciales con sospecha de laringotraqueitis infecciosa (ILT) para la detección de virus ILT empleando microscopía electrónica directa (EM), aislamiento viral (VI) en cultivos celulares primarios de hígado de embrión de pollo y mediante un método de amplificación del ADN (reacción en cadena de la polimerasa, PCR). El virus ILT fue identificado en 22 brotes y en 58 de 72 muestras. La técnica del PCR detectó el virus en 52 de 72 muestras y VI fue positivo en 48. En cinco casos, VI fue positivo mientras que los otros dos métodos fueron negativos y, en tres casos, PCR fue el único método positivo. El examen directo mediante EM detectó virus únicamente en 19 de 58 muestras positivas y en ningún caso este método fue el único positivo. Una ventaja del PCR es que puede detectar virus en muestras muy contaminadas con bacterias que hacen el aislamiento viral difícil; en otras ocasiones, este método dio resultado positivo para el virus ILT cuando el único virus detectado mediante cultivo celular fue adenovirus.

Notes

Present address: ¹Department of Veterinary Clinical Science, Leahurst, Neston, South Wirral. L64 7TE, UK.