Inhibition of acid phosphatase detection in mixed semen-blood training samples by anti-coagulants present in blood collection tubes

Abstract

Acid phosphatase detection using fast blue or fast black reagent is routinely performed at the RCMP National Forensic Laboratory Services as a presumptive test for semen. In training exercises, samples consisting of semen mixed with blood were reported to yield negative results with the fast black reagent. To determine the cause of the inhibition, mixed semen-blood stains were prepared using different blood sources, anti-coagulants, and layering techniques, before being tested with the fast blue or the fast black reagent. The anti-coagulant sodium fluoride (NaF) was shown to cause false negative results with the fast black reagent and to impair detection when using the fast blue reagent while no inhibition was observed when dipotassium EDTA (K₂ EDTA) was used as anti-coagulant. Four different toothpastes containing fluoride were also tested for potential inhibition of semen detection. Inhibition was observed when semen was mixed with three of the undiluted toothpastes but not with diluted toothpastes (1 in 20 in water). These findings highlight the importance of using appropriate blood sources when preparing mixed semen-blood stains for the purpose of training and proficiency testing in a forensic laboratory. However, forensic casework samples are not expected to contain NaF at the inhibiting levels.

RÉsumÉ

La détection de la phosphatase acide à l'aide du réactif fast blue ou fast black est couramment effectuée aux Services nationaux de laboratoire judiciaire de la GRC comme test de présomption pour le sperme. Lors d'exercices de formation, on a constaté que des échantillons de sperme mélangés à du sang produisaient des résultats négatifs avec le réactif fast black. Afin de déterminer la cause de cette inhibition, des taches de sperme et de sang ont été préparées en utilisant différentes sources de sang, des anticoagulants et plusieurs techniques de déposition, avant d’être testées avec le réactif fast blue ou fast black. Il a été démontré que le fluorure de sodium (NaF), un anticoagulant, provoquait des résultats faussement négatifs avec le réactif fast black et nuisait à la détection lors de l'utilisation du réactif fast blue alors qu’aucune inhibition n'a été observée lorsque l'EDTA dipotassique (K₂ EDTA) était utilisé comme anticoagulant. Quatre différents dentifrices contenant du fluorure ont aussi été testés pour leur impact sur la détection de la phosphatase acide. Une inhibition a été observée lorsque le sperme a été mélangé à trois des dentifrices non dilués mais pas à des dentifrices dilués (1 dans 20 dans l'eau). Ces résultats montrent l'importance d'utiliser des sources de sang appropriées lors de la préparation de taches de sang mélangées à du sperme à des fins de formation et pour des tests de compétence en laboratorire judiciaire. Par contre, il est peu probable que des échantillons judiciaires contiennent des niveaux de fluorure pouvant causer une inhibition.

Keywords:

• Acid phosphatase
• semen presumptive test
• fast blue/black
• false-negative
• anti-coagulants
• sodium fluoride (NaF)

Disclosure statement

No potential conflict of interest was reported by the author(s).