New near ultraviolet laser-induced native fluorescence detection coupled to HPLC to analyse residues of oxolinic acid and flumequine: a comparison with conventional xenon flash lamp
Nuevo método de análisis de residuos de oxolínico y flumequina utilizando la detección de la fluorescencia nativa inducida por láser acoplada en el ultravioleta cercano acoplada al HPLC: comparación con la lámpara de xenon convencional

Abstract

A new high-performance liquid chromatography (HPLC) method is described for the determination of oxolinic acid and flumequine, with ultraviolet laser-induced fluorescence detection (UV-LIFD). Near-UV excitation at 325 nm was obtained by using an He/Cd laser. Data obtained using UV-LIFD and conventional fluorimetry (Xenon flash, λ_exc 325/ λ_em 365) are compared under the same chromatographic conditions, connecting in series both detectors, in terms of linearity, reproducibility and repeatability. The HPLC separation is carried out on a Synergi MAX-RP column with water–acetonitrile (2:1, v/v) adjusted at pH 2.5, with formic acid, as mobile phase and completed in less than 9 min. The detection limits of oxolinic acid and flumequine at a signal-to-noise ratio of 3 were 0.43 pg and 0.76 pg on column with UV-LIFD detection, making this method considerably more sensitive than traditional fluorescence detector (16.15 pg and 14.17 pg) having some obvious advantages.

En este trabajo proponemos un nuevo método de cromatografía líquida de alta eficacia para el análisis de ácido oxolínico y flumequina con detección por fluorescencia inducida por Láser. La excitación ultravioleta cercana a 325 nm se obtiene usando un laser HE/Cd. Los datos obtenidos usando esta excitación se compararon con los obtenidos por fluorescencia normal (Xenon flash, λ_exc 325/λ_em 365) en las mismas condiciones cromatográficas, conectando en serie los dos detectores, en términos de linearidad, reproducibilidad y repetibilidad. La separación por HPLC se llevó a cabo con una columna Synergi MAX-RP con una fase móvil agua/acetonitrilo (2:1, V/V) ajustada a pH 2.5 con ácido fórmico, completándose en menos de 9 min. Los límites de detección, para una señal/ruido de 3, fueron 0.43 pg y 0.76 pg en columna para oxolínico y flumequina respectivamente, haciendo este método considerablemente más sensible que el tradicional detector por fluorescencia (16.15 pg y 14.17 pg), lo que tiene ventajas obvias.

Keywords:

• oxolinic
• flumequine
• laser induced fluorescence

Palabras clave:

• ácido oxolínico
• flumequina
• fluorescencia inducida por láser

Acknowledgements

Xesús Feás acknowledges a scholarship within the program “Formación de Personal Investigador” from Ministerio de Ciencia y Tecnología, Spain, and Ana Carreira for technical collaboration.