Amplificación múltiple de ADN para la detección de Escherichia coli O157:H7 y Salmonella spp. en canales de bovino
Multiplex DNA amplification to detect Escherichia coli O157:H7 and Salmonella spp. in bovine carcasses

Figures & data

Tabla 1. Iniciadores empleados.
Table 1. Oligonucleotide used.

Bacteria	Gen amplificado	Tamaño del amplificado (pb).	Nombre	Secuencia de nucleótidos
E. coli O157:H7	SLT – I	348	STL-P	5′-CAgTTAATgTggTggCgAAgg-3′^5
			STL-N	5′-CACCAgACAATgTAACCgCTg-3′^5
E. coli O157:H7	SLT-II	584	PST-P	5′-ATCCTATTCCCgggAgTTTACg-3′^5
			PST-N	5′-gCgTCATCgTATACACAggAgC-3′^5
E. coli O157:H7	gen uidA	252	UID-P	5′-gCgAAAACTgTggAATTggg-3′^5
			UID-N	5′-TgATgCTCCATAACTTCCTg-3′^5
E. coli O157:H7	gen eaeA	633	EAE-P	5′-CCATAATCATTTTATTTAgAgggA – 3′^6
			EAE-N	5′-gAgAAATAAATTATATTAATAgATCggA–3′^6
Salmonella	gen invA	284	INVA1	5′-gTgAAATTATCgCCACgTTCgggCAA-3′^7
			INV2	5′-TCATCgCACCgTCAAAggAACC-3′^7
Plásmido Bluscript		100	PBS 1	5′-GTACCgggCCCCCCCTCgAg-3′^8
			PBS 2	5′-ACCgCggTggCggCCgCTCT-3′^8

Tabla 2. Colonias sospechosas de Salmonella spp. aisladas en medios selectivos provenientes de muestras del rastro municipal.
Table 2. Colonies suspected of having Salmonella spp. isolated in selective cultures of meat samples from Mexican municipal slaughterhouses.

Medios de enriquecimiento
	Caldo tetrationato		Caldo selenito
	Agar sulfito bismuto	Agar entérico Hektoen	Agar sulfito bismuto	Agar entérico Hektoen
Número de colonias sospechosas	51	15	31	9

Tabla 3. Identificación presuntiva por pruebas bioquímicas de colonias sospechosas de Salmonella spp. provenientes de muestras del rastro municipal.
Table 3. Identification by biochemical test from colonies suspected of having Salmonella spp. from meat samples from Mexican municipal slaughterhouses.

Medios de enriquecimiento
	Caldo tetrationato						Caldo selenito
	Agar sulfito bismuto			Agar entérico Hektoen			Agar sulfito bismuto			Agar entérico Hektoen
	LIA	TSI	CIT	LIA	TSI	CIT	LIA	TSI	CIT	LIA	TSI	CIT
Número de colonias sospechosas	10	5	27	10	11	3	9	5	15	6	6	4
LIA: Agar Hierro Lisina, TSI: Triple Azúcar Hierro, CIT: Agar Citrato de Simmon's.

Tabla 4. Prueba de aglutinación con suero polivalente para Salmonella en colonias sospechosas en muestras provenientes del rastro municipal.
Table 4. Agglutination test with polyvalent serum for Salmonella in colonies suspected from having it, in meat samples from Mexican municipal slaughterhouses.

Medios de enriquecimiento
	Caldo tetrationato						Caldo selenito
	Agar sulfito bismuto			Agar entérico Hektoen			Agar sulfito bismuto			Agar entérico Hektoen
	LIA	TSI	CIT	LIA	TSI	C	LIA	TSI	CIT	LIA	TSI	CIT
Número de colonias	0			1				0			1
LIA: Agar Hierro Lisina, TSI: Triple Azúcar Hierro, CIT: Agar Citrato de Simmon's.
0: Cero colonias aglutinadas, 1: Una colonia aglutinada.

Figura 1. Amplificación múltiple por PCR para Escherichia coli O157:H7 y Salmonella spp. con diferentes concentraciones de DNA. Los genes amplificados son eaeA, uidA, stlI, stlII, invA y pBS, correspondientes a E. coli (los cuatro primeros), Salmonella spp. y pBS respectivamente. Gel de agarosa al 3% teñido con bromuro de etidio 0,5μg/ml. PCR con dos mM de Mg⁺⁺. En el carril uno se encuentra el marcador de peso molecular correspondiente a pBR322/Msp1. En el carril dos se observa la amplificación múltiple con 0,00000015 ng de DNA/μl; en el carril tres se observa la amplificación múltiple con 0,00015 ng de DNA/μl; en el carril cuatro se observa la amplificación múltiple con 0,0015 ng de DNA/μl; en el carril cinco se observa la amplificación múltiple con 0,15 ng de DNA/μl; en el carril seis se observa la amplificación múltiple con 15 ng de DNA/μl. En el carril siete, control positivo.

Figure 1. Multiple PCR amplification for E. coli O157:H7 y Salmonella spp. using different concentrations of DNA. The genes to amplify are eaeA, uidA, stlI, stlII, invA y pBS, from E. coli (the first four) and Salmonella spp. and pBS respectively. Agarose gel at 3% tainted with ethidium bromide at 0.5 mg/ml. PCR with two mM of Mg⁺⁺. Track one: molecular weight marker pBR322/Msp1. Track two: multiple amplification 0.00000015 ng de ADN/ml. Track three: multiple amplification 0.00015 ng de ADN/ml. Track four: multiple amplification 0.0015 ng de ADN/ml. Track five: multiple amplification 0.15 ng of ADN/ml. Track six: multiple amplification 15 ng de ADN/ml. Track seven: positive control.