Antioxidant, antihemolysis, and retinoprotective potentials of bioactive lipidic compounds from wild shrimp (Litopenaeus stylirostris) muscle

Figures & data

Table 1. Indicators of antioxidant activity and half-maximal inhibitory concentration (IC₅₀) of antihemolysis activity of fractions obtained from wild shrimp (Litopenaeus stylirostris) muscle.

Tabla 1. Indicadores de actividad antioxidante y concentración inhibitoria 50% (IC₅₀) de la actividad antihemólisis de las fracciones obtenidas del músculo del camarón salvaje (Litopenaeus stylirostris)

Fraction	Antioxidant (μM TE/gf)			Antihemolysis IC50 (μg/mL)
	ABTS	DPPH	FRAP
A	6.4 ± 0.3 c	437 ± 101 bcd	15.7 ± 4.6 ab	437 ± 101 cd
B	2.7 ± 2.4 a	779 ± 64 gh	36.2 ± 5.7 cd	779 ± 64 gh
C	1.4 ± 0.2 a	648 ± 99 efg	15.9 ± 1.3 ab	648 ± 99 efg
D	14.9 ± 0.4 e	1533 ± 89 j	75.2 ± 4.6 g	1533 ± 89 j
E	15.2 ± 0.4 e	315 ± 24 ab	3.3 ± 1.0 a	315 ± 24 bc
F	4.7 ± 0.0 bc	632 ± 23 defg	67.9 ± 7.0 efg	632 ± 23 efg
G	4.2 ± 0.0 bc	471 ± 79 bcde	56.3 ± 3.7 ef	471 ± 79 cde
H	10.6 ± 0.6 d	550 ± 11 cdef	72.0 ± 8.3 fg	550 ± 11 def
I	3.3 ± 0.5 ab	887 ± 80 h	18.2 ± 2.9 ab	887 ± 80 h
J	2.4 ± 1.5 a	1095 ± 21 i	11.1 ± 2.6 ab	1095 ± 21 i
K	10.1 ± 0.3 d	871 ± 69 h	99.5 ± 9.9 h	871 ± 69 h
L	1.4 ± 0.5 a	308 ± 71 ab	128.1 ± 8.5 i	308 ± 71 bc
M	21.1 ± 2.4 g	213 ± 82 a	166.7 ± 7.2 j	213 ± 82 ab
N	4.7 ± 1.2 bc	598 ± 12 cdefg	97.9 ± 1.5 h	598 ± 12 defg
O	2.9 ± 0.6 ab	538 ± 13 cdef	51.9 ± 4.9 de	538 ± 13 def
P	2.6 ± 0.4 ab	418 ± 35 bc	112.3 ± 2.7 hi	418 ± 35 cd
Q	18.0 ± 0.2 f	429 ± 16 bc	8.6 ± 2.00 ab	429 ± 16 cd
R	4.7 ± 1.2 bc	728 ± 93 fgh	24.17 ± 5.75 bc	728 ± 93 fgh
GA				49 ± 13 a

The value means ± S.D. of three determinations. Different letters within the same column indicate significant difference (P ≤ 0.05); Tukey´s least significant difference test. In the antihemolysis activity, DMSO was used as a positive control instead of bioactive fractions since resulted in 100% hemolysis. Fractions were obtained from open column chromatography. TE: Trolox equivalents, gf: gram of fractions. GA: gallic acid.

El valor representa la media ± DE de tres determinaciones. Las distintas letras dentro de la misma columna indican que existe una diferencia significativa (P ≤ 0.05); prueba de Diferencia Mínima Significativa de Tukey. En la actividad antihemólisis, se usó DMSO como control positivo en lugar de fracciones bioactivas, ya que resultó en hemólisis al 100%. Las fracciones se obtuvieron mediante cromatografía en columna abierta. TE: equivalentes de Trolox, gf: gramo de fracciones. GA: ácido gálico.

Figure 1. Cell viability of ARPE-19 cells exposed to a) different concentrations of H₂O₂ (0.06 to 20 mM) for 30 min, and b) to different concentrations of fraction M (fM) (12.5 to 400 μg/mL) for 24 h. Values represent means from three determinations. Control cell cultures were incubated with DMSO as the vehicle solvent at a maximum concentration of 0.5% and represent 100% viability.

Figura 1. Viabilidad celular de las células ARPE-19 expuestas a: a) diferentes concentraciones de H₂O₂ (0.06 a 20 mM) durante 30 min y b) diferentes concentraciones de fracción M (fM) (12.5 a 400 μg/mL) durante 24 horas. Los valores representan las medias de tres determinaciones. Los cultivos celulares de control se incubaron con DMSO como disolvente vehículo a una concentración máxima de 0.5% y representan una viabilidad de 100%

Figure 2. Cell viability of H₂O₂-induced damage ARPE-19 cells, previously exposed to 100 μg/mL of different fractions from wild shrimp (Litopenaeus stylirostris) muscle after 4 and 24 h. Values represent means from three determinations. Different letters among bars mean significant differences (P ≤ 0.05); Tukey´s least significant difference test. Fractions were obtained from open column chromatography.

Figura 2. Viabilidad celular de células ARPE-19 con daño inducido por H₂O₂, previamente expuestas a 100 μg/ml de diferentes fracciones del músculo del camarón salvaje (Litopenaeus stylirostris) después de 4 y 24 horas. Los valores representan las medias de tres determinaciones. Las distintas letras entre barras significan que existen diferencias significativas (P ≤ 0.05); prueba de Diferencia Mínima Significativa de Tukey. Las fracciones se obtuvieron mediante cromatografía en columna abierta

Figure 3. Effect of H₂O₂ on structural cellular aspects of ARPE-19 human cell line, and the retinoprotective effect of fraction M (fM) against H₂O₂-induced cell injury. Cells actin-microfilament cytoskeleton (red-colored) and nuclear DNA (blue-colored), after staining with phalloidin and DAPI, respectively. Observations were made at 20x. Control cells were incubated with DMSO as the vehicle solvent at a maximum concentration of 0.5% and represent no morphologic changes.

Figura 3. Efecto de H₂O₂ sobre los aspectos celulares estructurales de la línea celular humana ARPE-19 y efecto retinoprotector de la fracción M (fM) contra la lesión celular inducida por H₂O₂. Citoesqueleto de actina y microfilamento de células (de color rojo), y ADN nuclear (de color azul), después de su tinción con faloidina y DAPI, respectivamente. Las observaciones se hicieron a 20x. Las células control se incubaron con DMSO como disolvente vehículo a una concentración máxima de 0.5% y no representan cambios morfológicos

Figure 4. Retinoprotective effect of fraction M (fM) against H₂O₂-induced intracellular ROS production in ARPE-19 cells. a) Intracellular ROS production in cells exposed to different concentrations of H₂O₂. b) Intracellular ROS production in cells treated with different concentrations of fM during 24 h. c) Intracellular ROS production in cells treated with and without 250 μM H₂O₂ and fM at different concentrations per 24 h, (-) stimulus not used, (+) stimulus used. d) Microscopic visualization of the effect of fM on H₂O₂-induced intracellular ROS production. Images were selected as representative data from three independent experiments (at 20x). Control: not stimulated cells. Each value represents the mean ± SD of three independent experiments (P ≤ 0.05); Tukey´s least significant difference test.

Figura 4. Efecto retinoprotector de la fracción M (fM) contra la producción de ROS intracelular inducida por H₂O₂ en células ARPE-19. a) Producción intracelular de ROS en células expuestas a diferentes concentraciones de H₂O₂. b) Producción intracelular de ROS en células tratadas con diferente concentración de fM durante 24 horas. c) Producción intracelular de ROS en células tratadas con y sin H₂O₂ 250 μM y fM a diferentes concentraciones por 24 horas; (-) estímulo no utilizado, (+) estímulo utilizado. d) Visualización microscópica del efecto de fM sobre la producción de ROS intracelular inducida por H₂O₂. Las imágenes se seleccionaron como datos representativos de tres experimentos independientes (a 20x). Control: células no estimuladas. Cada valor representa la media ± DE obtenida en tres experimentos independientes (P ≤ 0.05); prueba de diferencia menos significativa de Tukey

Table 2. ¹³C- and ¹H-NMR analyses of fraction M dissolved in CDCl_3.

Tabla 2. Análisis de ¹³C y ¹H-RMN de la fracción M disuelta en CDCl_3.

Indolocarbazole alkaloid derivative			Eicosapentaenoic acid			Dioctyl phthalate
No.	δC	δH	No.	δC	δH	No.	δC	δH
2	172.51		1	174.47		1		7.53 (dd, J = 5.6, 3.3 Hz, 2H)
3	134.00		2	33.45	2.27 (m, 2H)	2		7.71 (dd, J = 5.6, 3.3 Hz, 2H)
5	123.44		3	24.32		5		4.22 (m, 4H)
6	110.89	7.32 (d, J = 2.6 Hz, 2H)	4	28.78	2.02 (m, 2H)	6, 7, 8, 9, 11		1.25 (s, 18H)
7	153.98		5, 6, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 17, 18	129 – 127	5.35 (m, 10 H)	10, 12		0.88 (m, 12H)
8	116.66	7.13 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 2H)
9	109.95	7.52 (d, J = 8.7 Hz, 2H)	7, 10, 13, 16, 19	26.39	2.80 (m, 12 H)
10	129.11		20	13.43	0.90 (t, 3H)
11	132.10
12	65.45	3.65 (m, 2H)
13	71.10	3.71 (m, 2H)
14	56.27	3.47 (t, J = 4.0 Hz, 1H)
15	14.89	1.14 (d, J = 6.28 Hz, 6H)
18		9.77 (s, 2H)
19	162.84

δ: chemical shift, J: coupling constant, d: doublet, dd: a doublet of doublets, t: triplet, m: multiplet, s: singlet.

δ: desplazamiento químico, J: constante de acoplamiento, d: doblete, dd: doblete de dobletes, t: triplete, m: multiplete, s: singlete.